高产谷胱甘肽优良酵母菌种的选育及发酵条件研究-生物化工专业论文.docxVIP

韭塞些点查堂堂主鲎垡笙兰——— 高产谷胱甘默优良酵母菌种的选育及发酵条件磅究 摘要 本文对谷胱甘肽高产菌株的选肖及培养条件进行了研究。 蒋先魄较荠改遴了文献中搬道熬三辑矮撅登谷魏苕蘸的测定方法，攀鼗硝 旗铁氰化钠法、四氧嘧啶法和DTNB法。／殴进后的三神方法的精密度都较礴， 掰强潦{睾麓单快速。对于圈筑缓啶溶鞫DTNB法，半璇氨酸簿含巯蒸物质不干 扰测定，其中DTNB法更简举经济。L，户“一 涎定了295穰枣爵嵇瓣斡酵鸳越懿筵三镌爨及腿蠹GSH含量，扶孛秽g逸醛一 撩生犊萋较褰熬酿灌蘸母(Saccharomyces cerevisiae)二继髂￥64秘～穰GSH含 曩较高鹣蘸麓汁酵母(s uvarum)=缮髂Y247。对它稍迸嚣攀倍髂分离，觚中 挑出生物量鞍裹酶蕈撩谆蘧棒Y64。t4、Y64-32和GSH含量较高款零媸诲毽撩 Y247，6进行DES诱变，获得营养缺陷性突畿株。 ／挑选突变株Y64，32．76(a，谤f)帮Y247-6-21(鑫，Met)律为融合象拣，遴避 躁龟旗体融合获得生物量和GSH含激都铰离的融合予ZJF．71，对其避行鉴定和 遗传稳定性分褥。融会予ZJF．71躲GSH台爨这裂t,85mg／g澎鳃瞧，GSH慧繁 分别比融合亲株Y64．32．76和Y247。6-2l摄商了100％和88％。 熬选突变蕊Y64一14一毯程，UraLeff)襁Y247--6-7(a，越菩)谗为杂交亲椽，i蘸过 杂交获鼹生穆蓬积GSH含量鄂较蠢黪聚交爱代YHB。12，对獒送行鉴定葶羹邃镶 稳定缝势褥。杂交嚣健YHB-12骢GSH含量这委1．49m晷lg漂絮庭，GSH憨鬣 分割魄杂交亲株Y64．14．2霸Y247．6-7掇离了124％秘65％。 在摇瓶中对融合予ZJF-71静发游璐莽恭鞠培养条彳牟进行了优诧。研究了不 同碳源和氮源对融合子ZJF．71发酵=熬产GSH的影响，确定合适的碳源为工她 葡萄潞，有撬氮源为酵母耪，无税氮滁为(NH4)2SO。，正交实验确定最佳浓度为 酵母粉O．7％，葡萄糖2％，(NH4)2s04 O．6％；考察了誉阉的天机盐的影响，正 交实验确定最镳浓度为MgS04·7H20 O．05％，KH2POa0。1％，确HP04·31-120 O．25％，CaCh·2H20 O．01s％；比较了不怒懿蒸酸的影晦，发瑷睾璇氮酸帮激 氮羧鼗够硬显疆毒GSH含量，谷氨黢旋照磐撬褰玺魏壤。对援瓶培券条传遴露 後纯，臻定蘩莽基戆麓戆pH为6。6。  托裹佬工大学硬士擎健论文 在摇瓶中对杂交后代YHB．12的培养基和培养条件进行了优化。确定碳源 为工业葡萄糖，有机氮源为酵母粉，无机氮源为(NI{4)2S04。正交实验确定浓度 为酵母粉0．7％，葡萄糖2％，(NH4)2s04 0．6％；考察了培养基中添加不同的无机 鼗酌影嗡，结莱表骧除MgS04癸，其健足耱蠢穰鼓对GSH愚蠢没骞显著兹影 璃；眈鞍了不同的氨基酸辩杂交后代YHB．12积累GSH的影确，发现半胱氨酸 和蛋氨酸能够明显提高GSH含量，谷氨酸能黧蒋提高生物量。对摇瓶培养条件 进行优化，确定培养基的初始pH为6．6 o】声广一 谯邋气搅拌发酵罐中对融合予ZJF．71的发黪过程进行了研究。与摇瓶发酵 缝鬃魄竣，在发酵罐中发黪承乎毒了较大溪凄豹瞧毫。 关键词：谷胱甘哆酵够选弓原生质体融令杂交，发酵条件 《，  北京化工失举颤士举经论文 THE BREEDING 0F HlGH GLUTATHIONE- pROD毯ClNG STRAlNS AND Op骶鑫垂lZAHoN o爹C甏L零移瓤嚣CO篾矜l蕈loN ABSTRACT The breeding ofhigh glutathione-producing yeast strain and optimization of cuMvation conditions were studied， Colorimetric assays for reducing glutatbSone姆Alloxan method，Sodium Nitroprusside method and DTNB method were comp嚣ed and modified。The result showed that Alloxan method and DTNB method could avoid the disturb of cysteine+ DTNB method was mole easily and economic。 The biomass and GSH content of295 yeast strains from different species and genera were tested．Diploid strain