高强度聚焦超声诱导阿苯达唑热敏脂质体杀伤细粒棘球蚴的研究-病原生物学专业论文.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 ABZ Albendazole 阿苯达唑 DPPC Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine 二棕榈酰磷脂酰胆碱 DSC Differential scanning calorimetry 示差扫描量热法 DSPG 1,2-Dioctadecanoyl-sn-glycero-3-phospho-r ac-(1-glycerol) ammonium salt 二硬脂酰磷脂酰甘油 HE Hematoxylin and Eosin 苏木精-伊红染色 HIFU High Intensity Focused Ultrasound 高强度聚焦超声 MPPC 1-tetradecanoyl-2-hexadecanoyl-sn-glycero- 3-phosphocoline 单棕榈酰磷脂酰胆碱 min Minute 分钟 PBS Phosphate buffered saline 磷酸缓冲液 rmp Revolution per minute 每分钟转速 s Seconds 秒 TEM Trabsmission Electron Microscope 透射电镜 TGA gravitational analysis 热重分析 TSL Thermosensitive liposomes 热敏脂质体 TUNEL TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling 细胞凋亡荧光染色 1 高强度聚焦超声诱导阿苯达唑热敏脂质体 杀伤细粒棘球蚴的研究 摘 要 目的 探索高强度聚焦超声（ High intensity focused ultrasound, HIFU）诱导阿苯达唑热敏脂质体（Thermosensitive liposomes loaded with albendazole, TSL-ABZ）杀伤包虫原头蚴的效果。利用 HIFU 的 热效应来诱导热敏脂质体靶向释药，从而提高阿苯达唑的生物利用度， 增强对包虫病的治疗效果。 方法 1.采用单因素实验，来确定阿苯达唑热敏脂质体的制备方法。通过 考察有机溶剂种类及用量、合成磷脂间的比例、水合介质 pH 值、脂类 与药物比例、水浴温度等因素，初步确定制剂处方和工艺条件。 2.通过透射电镜、Nano ZS90Zetasizer 粒径测量、傅里叶近红外光 谱分析、热重分析、体外释放浓度测试等手段对该药物载体进行表征 考察，以证明是否成功制备阿苯达唑热敏脂质体。 3．观察阿苯达唑热敏脂质体对离体原头蚴的影响。在不同水浴温 度下，将不同比例的阿苯达唑热敏脂质体加入含有原头蚴的囊液中， 测定药物浓度及在制剂作用影响下原头蚴的活力。 4.观察 HIFU 诱导阿苯达唑热敏脂质体对离体原头蚴的杀伤效果。 2 在一定高强度超声剂量下，将不同比例的制剂药物加入原头蚴悬液中， 在光镜下观察形态改变并计数其死亡率，HE 染色、透射电镜观察原头 蚴组织病理结构的变化，TUNEL 荧光染色观察原头蚴核凋亡情况。 结果 1. 实验筛选出最佳的制备处方为：在药脂比为 1:40 ， DPPC:MPPC:DSPG:ABZ 成分比为 66：7：5：3，缓冲液 pH 值为 5.3， 超声时间为 15 min，水浴温度为 38℃条件下，热敏脂质体的平均包封 率为 78.7%，ABZ 载药率为 1.91%。 2.透射电镜下空白热敏脂质体为环形空心结构，而阿苯达唑热敏脂 质体呈黑色圆球状；粒径分析仪测定制备的 TSL-ABZ 的平均粒径为 316 nm，PDI 为 0.533，Zeta 电位为-9.84 mV；红外光谱测试表明药物 与载体间未发生化学作用力，且药物 ABZ 的结构也未发生改变，并证 明药物被包含在脂质体结构中；DSC 曲线证实制备的脂质体具有热敏 特性，其相变温度约为 42.1℃。 3.在水浴时间 24 h，水浴温度为 42℃时，TSL-ABZ 1000 μl 组能最 大程度诱导原头蚴死亡，死亡率较其他组更高。 4.经过温度测试后，选择达到相变温度的最适 HIFU 辐照剂量（75W 12 s ），各实验组原头蚴的死亡率呈现一定的增长趋势，尤以 HIFU+TSL-ABZ 1000 μl 组为最高，形态学观察发现皮层破坏严重，钙 颗粒消失，空泡化严重，头钩脱落，部分结构甚至消失。荧光染色可 见大量凋亡的细胞核。 3 结论 1．通过本实验方法制备的热敏脂质体成功包裹了阿苯达唑标准 品，脂质体的形貌规则且呈单分散状态。粒径也已达到纳米级，分散 均一，制剂体系比较稳定。 2.热敏性磷脂可以控制药物释放，可依据实验条件选择性的作用 于实验对象。在室温