高强度聚苯乙烯荧光微球制备表征-药物分析专业论文.docxVIP

中文摘要 聚苯乙烯荧光微球在生物医学领域有着越来越广泛的应用，其中的一项重要 应用是基于荧光微球的流式细胞分析技术，该技术可广泛用于细胞分选、定量、 免疫分析及快速诊断。该技术采用两种粒子：荧光标准校正微球用于仪器的校正 及定量研究，荧光编码微球用于高通量免疫分析，而这两种粒子都要求荧光强度 高、精确定量染色、单分散性好。 目前已有的聚苯乙烯荧光微球制备方法中，吸附法、键合法、包覆法等表面 修饰方法制得的微球稳定性差，染料分子容易脱落、泄露。包埋法、共聚法等存 在染料干扰聚合反应过程的现象。而溶胀法以其操作简单，制得的荧光微球性质 稳定、可以精确定量染色，从而引起广泛关注。然而传统的溶胀法通常将聚苯乙 烯种子微球分散于异丙醇等有机溶剂中采用甲苯、氯仿等作为溶胀剂将荧光染料 引入微球中，这种方法制得的微球荧光非常微弱，容易造成种子微球溶解粘连， 并且制备过程对环境污染大。 本文对聚苯乙烯荧光微球制备的传统溶胀法进行了改进，并将改进后的溶胀 法与传统溶胀法、共聚法、包埋法进行了比较，结果显示改进溶胀法操作简便、 干扰因素少、可以定量染色、环境友好，制备出的微球性质稳定、荧光强度高、 单分散性好。全文共分以下几部分内容： 首先，对荧光微球制备的传统溶胀法进行改进，以二氯甲烷作溶胀剂，0.25 % SDS 水溶液作分散体系分别将 NBD-A、罗丹明 B 正辛酯、Nile blue A 溶胀进聚 苯乙烯微球，制备出了荧光强度高、单分散性好、光学性质稳定、定量染色的绿 色、橙色、红色三种荧光微球。将发生荧光共振能量转移的两种染料罗丹明 B 正辛酯与 Nile blue A 同时溶胀进种子微球中而制备了能产生双荧光信号的荧光 编码微球。对溶胀法制备的荧光微球的稳定性进行了考察，结果显示其 pH 稳定 性、光稳定性良好。 第二，对其它荧光微球制备方法：共聚法、包埋法、二步溶胀法进行了考察， 并将改进后的溶胀法与共聚法、包埋法进行了比较，结果显示，这几种方法制备 的荧光微球性质都比较稳定，其中溶胀法干扰因素最少、操作最为简便。几种方 法结合使用，成功制备出了粒径 0.1 ?m – 15 ?m、性质稳定、单分散性良好的 绿色、橙色、红色三种荧光微球，可满足不同领域的应用需要。 第三，采用流式细胞仪对溶胀法制备的荧光微球进行表征。 综上所述，本文对聚苯乙烯荧光微球制备的传统溶胀法进行了改进，将其与 传统溶胀法、共聚法、包埋法等方法进行了比较，并为其在流式细胞仪中的应用 打下一定基础。 关键词：改进的溶胀法，单分散，聚苯乙烯荧光微球，荧光编码微球 ABSTRACT Fluorescent microspheres are widely applied in biomedicine field; one of the most important applications is Cytometric Bead Array, which could be used in basic and applied proteomic research as well as for clinical diagnosis. Two spheres are used in this technology: quality-control beads for checking linearisy and sensitivity of the instrument; encoded beads for high-throughput immunoassay. Both of them should be dyed precisely, monodisperse and can emit strong fluorescence. Many strategies have been proposed for the preparation of flurescent beads. Surface modification strategies such as adsorption method, chemical bonding method and coating method are usually used in bead staining, but this approach is quite limit in stability. Encapulation and copolymerization method provide an alternative way to stain beads, but the dye added was interference to polymerization. Among all of the staining method