高迁移率族蛋白B1诱导严重烧伤大鼠枯否细胞促炎性细胞因子产生的分子机制外科学(烧伤)专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 缩写对照表 HMGB1 high mobility group box 1 高迁移率族蛋白 KC Kupffer cells 枯否细胞 TNF-α tumor necrosis factor-α 肿瘤坏死因子-α IL-1β interleukin-1β 白细胞介素-1β RAGE receptor for advanced glycation end products 晚期糖基化终末产 物受体 TBSA the total body surface area 体表总面积 ELISA enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附 W-T western blot 蛋白印迹 OD optical density 光密度 TLR Toll-like receptor Toll样受体 EMSA electrophoretic mobility shift assay 凝 胶 迁 移 或 电 泳 迁 移 率实验 NF-κB nuclear transcription factor kappa-B 核转录因子kappa-B P38-MAPK p38 mitogen2activated protein kinase P38 丝裂原活化蛋白激酶 JNK c-Jun N—terminal kinase c-Jun 氨基末端激酶 ERK extracellular signal-regulated kinase 细胞外信号调节激酶 中文摘要 高迁移率族蛋白 B1 诱导严重烧伤大鼠枯否 细胞促炎性细胞因子产生的分子机制 一. 研究背景 尽管在过去几十年中，烧伤的预防，治疗及康复有了长足的进步，但全身炎 症反应引起的脓毒症和多器官功能障碍综合症依然是重度烧伤患者最重要的死 亡原因。作为机体新陈代谢和免疫反应的核心，肝脏被认为是启动重度烧伤病 人多器官功能衰竭的重要器官。炎性细胞因子如 TNF-α 和 IL-1β 被证明是烧 伤早期最重要的细胞因子，同时，它们在引起肝细胞功能障碍过程中也起到重 要作用。 枯否细胞（KCS）是一种重度烧伤早期炎症因子释放的重要来源。KCs 存在 于肝血窦中，该部位含有人体内存在于固定组织中数量最庞大的巨噬细胞。研 究表明，KCs 在宿主的免疫反应引起的系统变化中起到关键作用，其作用表现 在引起细胞因子释放和上调。通过早期研究，我们发现 KCs 是重度烧伤早期 TNF-α 和 IL-1β 释放的重要来源，并且导致了烧伤后的肝损伤。 高迁移率族蛋白 B1（HMGB1）是一种高度保守的非组蛋白染色体蛋白质，最 初认为它是一种参与维护核小体结构和调节基因转录的 DNA 结合蛋白。但最新 研究发现，HMGB1 作为一种强有力的促炎性细胞因子和“晚期”炎症介质参与 了全身炎症反应的发展。此外，人单核细胞培养纯化的重组 HMGB1 具有显著刺 激细胞因子（如 TNF-α，IL-1α，IL-1β，IL-6 和 IL-8）释放的功能。HMGB1 不仅可通过损伤和坏死的细胞被动释放，还可以通过应激状态下的单核细胞和 巨噬细胞主动分泌。最新数据表明，大面积烧伤患者血浆中 HMGB1 水平明显升 高。然而，HMGB1 在烧伤后 KCs 释放促炎性细胞因子中的作用目前仍未完全阐 明。 细胞外 HMGB1 的生物学功能通过激活连接到 TLR2，TLR4，TLR9 和晚期糖基 化终末产物受体(RAGE）的信号转导途径介导。研究表明 RAGE 在 HMGB1 引起的 巨噬细胞活化中只起到次要作用，HMGB1 主要通过 Toll 样受体信号途径（特别 PAGE PAGE 3 是 TLR2 和 TLR4）起到引起炎症反应的作用。研究发现烧伤后大鼠巨噬细胞 TLR2 和 TLR4 表达增加，TLR4 缺陷小鼠烧伤后不易发生肝损伤。 二. 研究目的 基于其在炎症病理生理过程中的关键作用，HMGB1 可能参了烧伤后 KCs 中炎 症因子的合成调节。因此，本研究主要有三个目的：①探讨 HMGB1 对严重烧 伤后 KCs 的功能影响；②研究严重烧伤后 HMGB1 对 KCs 作用的受体机制。是 否存在几种受体的共存？RAGE 受体和 TLR 受体谁起主要作用？③探讨严重烧 伤后 HMGB1 对 KCs 作用的受体后信号转导机制。“MAPK 和 NF-κB 信号 通路”关键分子是否参与 HMGB1 调控烧伤后 KCs 的活化？ 三. 研究内容 第一部分 高迁移率族蛋白 B1 对严重烧伤大鼠 KCs 分泌促炎性细胞因子的影响 实验使用健康成年雄性 SD 大鼠 32 只，体重 200-250g，购自安徽医科大学 动物中心。大鼠实验前进行一周环境适应。大鼠分为