高迁移率族蛋白B1对成骨细胞迁移和增殖的影响及其作用机制-外科学（骨外）专业论文.docxVIP

博士学位论文高迁移率族蛋白B1对成骨细胞迁移和增殖 博士学位论文 高迁移率族蛋白B1对成骨细胞迁移和增殖 的影响及其作用机制 博士研究生：李明静 指导教师：陈建庭教授 摘要 一、研究背景 骨髓问充质干细胞，成骨细胞和破骨细胞的分化、增殖及迁移是骨骼生长 发育，骨损伤后修复等各种骨基本生理过程中重要的组成部分。骨的功能包括 给软组织提供机械支持，保护大脑脊髓，支持造血等，以上骨功能的发挥依赖 于骨组织的持续更新，分别由成骨细胞和破骨细胞进行骨质生成和吸收。当骨 生成障碍或吸收过度时便可带来一系列相关疾病的发生，如成骨不全，骨不连， 类风湿性关节炎，骨质疏松等疾病。成骨不全是严重影响儿童骨骼发育的遗传 性疾病，而类风湿性关节炎、骨不连和骨质疏松是骨科中常见但治疗时间漫长， 花费较大且治疗效果不理想的疾病。随着技术的进步，除了传统的治疗方法， 细胞治疗，基因治疗为治疗骨科疾病也提供了新的可能。以往在治疗骨质缺乏 的疾病中多采用抑制骨吸收的方式，而促进骨质合成将会成为治疗这类疾病的 重要部分。了解骨系统中各细胞的功能及分子调控机制将会为治疗这些疾病提 供更有效的途径。 骨发育及损伤后重建受到细胞内外多种信号的调控，既包括发挥全身作用 的激素调控，也有细胞外因子的局部调控。目前研究较多的调控因子有骨形态 发生蛋I圭t(BMP)、成纤维细胞样生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF)、血小板 衍生生长因子(PDGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)禾IJ胰岛素样生长因子 万方数据 中文摘要fIGFl。其中，多篇报道表明BMP在治疗骨缺损，骨不连及股骨头坏死中取得 中文摘要 fIGFl。其中，多篇报道表明BMP在治疗骨缺损，骨不连及股骨头坏死中取得 了良好的疗效。胰岛素样生长因子．1在长骨的发育中发挥着重要的调控作用， 可通过抑制程序性凋亡增加骨髓问充质干细胞生存及诱导干细胞向软骨细胞分 化，促进细胞外软骨基质的表达。成纤维细胞样生长因子是体内最有效的血管 生存因子，同时对成骨细胞，成软骨细胞的增殖及分化有明显促进作用。 高迁移率族蛋白(high mobility group protein HMG)作为广泛存在于真核 生物细胞内的一类非组蛋白染色体结合蛋白，在细胞内通过与多种转录因子、 复制蛋白及甾体受体作用，参与DNA重组、修复、基因转录调控，细胞复制 和分化成熟等多种生理病理过程。但是它可以通过免疫细胞主动分泌到细胞外， 也可由坏死细胞被动释放到细胞外。在坏死细胞中，高迁移率族蛋白Bl (HMGBl)从染色体上解离，随着细胞膜及核膜的解体释放到细胞外。而在活 化的单核细胞，巨噬细胞及树状突细胞中，HMGBl可发生甲基化，转移到细 胞浆中，然后主动分泌到细胞外。当其释放到细胞外时，便广泛参与了多系统 疾病的发生发展。最先关于HMGBl细胞外作用是由学者Wang及同事报道， 在该文献中发现巨噬细胞在内毒素刺激8小时后可分泌HMGBl，应用HMGBl 的抗体可减少脓毒血症的死亡率，而应用HMGBl可导致大鼠的死亡。随后有 大量报道表明重组高迁移率族蛋白B1(HMGBl)可以促进成肌纤维细胞，成 肌血管细胞的增殖和迁移，是一种多功能细胞因子，参与了包括炎症，骨骼肌 心肌缺血再灌注损伤的修复，肝脏纤维化和肿瘤发生及转移的病理过程。 目前有许多研究均表明高迁移率族蛋白B1(HMGBl)也是一种骨活性细 胞因子，广泛参与着骨的多种生理病理过程。有研究表明在生长板的肥大软骨 层内细胞浆中可发现大量的HMGBl的聚集，通过组织培养证实软骨细胞可分 泌HMGBl，并且是在软骨细胞分化的早期进行。HMGBl基因敲除后发现大鼠 长骨的生长板明显增宽，成骨细胞和破骨细胞以及血管内皮细胞侵入能力下降， 长骨的生长发育受到明显限制，导致骨量下降，骨形态弯曲易于骨折。而且有 文献报道HMGBl可促进人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化并诱导其迁移， 万方数据 博士学位论丈但抑制干细胞的增殖。HMGBI联合脂质体(LPS)可促进骨性关节炎的滑膜成 博士学位论丈 但抑制干细胞的增殖。HMGBI联合脂质体(LPS)可促进骨性关节炎的滑膜成 纤维细胞向类风湿性关节炎的滑膜成纤维细胞表型转化，并诱导细胞的凋亡及 自噬的增加，增加骨关节软骨的破坏。 在骨骼系统中，骨髓间充质干细胞(BMSC)在受到HMGBl刺激后增加 了核因子kB受体活化因子配体／骨保护素(RANKL／OPG)的表达，释放了大 量的白介素一6(IL一6)和肿瘤坏死因子．a(TNF．a)。MLO—Y4骨细胞样细胞， MC3T3．El成骨细胞样细胞以及原代鼠骨髓来源的成骨细胞在受到肿瘤坏死因 子一a及环乙酰亚胺(CHX)刺激时发生凋亡，并且可释放HMGBl。HMGBl 的受体主要包括toll样受体2／4(TLR2／T