c型利钠肽对水牛卵母细胞减数分裂恢复的影响及其机制研究-动物遗传育种与繁专业毕业论文.docxVIP

其次探讨了C型利钠肽对水牛卵母细胞减数分裂恢复的影响及其作 其次探讨了C型利钠肽对水牛卵母细胞减数分裂恢复的影响及其作 用机制。水牛COCs先在含不同浓度CNP(0 nM，100 nM，200 nM，400 nM)的成熟液中预培养6 h，然后常规成熟培养18 h(即总成熟时间为 24 h)。结果发现，200 nM处理组的卵母细胞成熟率(68．36％VS 61．21％) 及随后体外受精(In vitro fertilization，IVF)胚胎的分裂率(75．20％VS 64．86％)、囊胚率(23．64％VS 16．29％)均显著高于对照组(氏O．05)。选 定200 nM为水牛卵母细胞成熟液中CNP适宜添加浓度，探讨CNP处理 的适宜时间。结果显示：CNP预培养COCs 6 h或9 h后，卵母细胞的成 熟率(68．72％和66．85％)、IVF卵裂率(75．03％和73．96％)和囊胚率 (24．38％和23．19％)均显著高于对照组(62．03％，66．83％和18．35％，P O．05)。然而，200 nM CNP预培养处理裸卵6 h对其成熟率(42．36％VS 41．97％)、IVF分裂率(49．73％VS 50．36％)和囊胚率(2．35％VS 2．46％) 均没有显著影响(胗O．05)。地衣红染色结果显示：200 nM CNP预培养 处理水牛COCs 6 h能显著推迟卵母细胞GVBD的发生时间(PO．05)。 QRT-PCR检测结果发现：水牛COCs经200 nM CNP培养处理6 h后能显 著提高其卵丘细胞的Cx37和Cx43以及NPR2的mRNA表达水平 (氏O．05)，但下调了卵母细胞中PDE3A的mRNA表达(尸O．05)。Elisa 检测发现： 200 nM CNP培养处理COCs 6 h能显著提高卵丘细胞、卵母 细胞中cGMP浓度(尸O．05)，以及卵母细胞中cAMP的浓度(尸O．05)； 而NPR2的抑制剂G6 6976能显著降低CNP提升卵丘细胞中cGMP、卵 母细胞中cAMP浓度的幅度(P0．05)。 以上结果表明：(1)CNP及其特异性受体NPR2的mRNA在水牛卵 万方数据 巢中呈现高水平表达，其中CNP主要表达在颗粒细胞，NPR2主要表达 巢中呈现高水平表达，其中CNP主要表达在颗粒细胞，NPR2主要表达 在卵丘细胞，但二者在卵母细胞均未见表达；(2)适宜浓度(200nM)的 CNP培养处理水牛卵母细胞一定时间(6h)能推迟其减数分裂的恢复， 这一作用可能是通过CNP与其受体NPR2相结合，产生cGMP，经缝隙 连接途径传递到卵母细胞中，抑制PDE3A的表达，提高卵母细胞中cAMP 水平来实现的。 关键词C型利钠肽水牛卵母细胞减数分裂恢复作用机制 万方数据 STUDIES STUDIES RELATED TO T眦EFFECT ANDⅧCHANISM OF C．TYPE八『ATRIURETIC PEPTIDE ON Ⅳ匝IOTIC RESI】-N【PTION OF BUFFALO OOCYTES AB STRACT C-type natriuretic peptide(CNP)is one of the main members of the natriuretic peptides，which widely express in many tissues of mammal．It has been reported that CNP plays an important role in meiotic resumption．The aim of this study was to investigate the effect of CNP on meiotic resumption of buffalo oocytes and its regulation meschanism，SO as to provide a foundation for further optimizing the IVM culture system and improving the efficiency of in vitro embryos production． Firstly,the mRNA expression of the mainly natriuretic peptides and their receptors in buffalo ovary were detected，the result of qRT-PCR showed that the mRNA expression of CNP was significantly higher than ANP a