fabp5pparβδ信号转导路对ras雄性小鼠肝癌发生发展的影响.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 目 录 一、摘要 ．-．．． ．1 (一)中文摘要 ．．1 (二)英文摘要 一3 二、正文 一6 ＼—1上．．．L (一)日lJ 吾 6 (二)材料和方法 ．．8 1．材料 8 2．方法 ．10 (三)结 果 16 1．病理分析 ．16 2．ERK蛋白的表达水平及磷酸化水平的变化 ．．1 6 3．P13K蛋白的表达水平及磷酸化水平的变化 ．17 4．AKT蛋白的表达水平及磷酸化水平的变化 ．17 5．I-r,B蛋白表达水平 ．．18 6．NF—v,B、P—NF．1(B及核蛋白、质蛋白中NF．v,B的变化 ．19 7．FABP5在小鼠体内表达水平的检测 ．．19 8．PPARl3／6在小鼠体内表达水平的检测 20 9．PPAR[3／6靶基因在小鼠体内表达水平的检测 ．．21 10．体外细胞系中P13K蛋白表达水平及磷酸化水平的变化．．23 11．体外细胞系中AKT蛋白表达水平及磷酸化水平的变化．．23 万方数据 12．体外细胞系中 12．体外细胞系中I-r．B蛋白表达水平的变化 24 13．P13K、AKT抑制剂对Hep3B细胞中NF—vd3及FABP5蛋白 表达水平的影响 一24 (四)讨 论 一25 (五)结 论 一28 (六)参考文献 一29 三、综述 ．．32 (一)综述 ．．32 (二)参考文献 ．．36 四、攻读学位期间发表论文情况 ．．39 五、致谢 ．．40 万方数据 大连医科大学硕士学位论文FABP5 大连医科大学硕士学位论文 FABP5／PPARp／6信号转导通路对Ras雄性小鼠肝癌发生发 展的影响 硕士研究生：李学风 指导教师：王爱国 教授 专业名称：动物学 摘 要 目的： 探究FABP5／PPAR[3／8信号转导通路对Ras雄性小鼠肝癌发生发展 的影响，为肝癌的防治研究提供有效的基础数据。 方法： 1．体内实验 对病理证实的正常雄性小鼠肝组织及Ras雄性小鼠肝癌组织及Ras雄性小鼠 肝癌旁组织进行总RNA及蛋白质的提取。应用RT-qPCR方法检测FABP5、 PPAR[3／8、PDKl及ILK的mRNA表达水平。用Western blot方法检测细胞外信 号调节激酶1／2(ERKl／2)、磷酸化ERK 1／2(p—ERKl／2)、磷脂酰肌醇3．激酶 (P13K)、磷酸化P13K、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT、NF．1B、磷酸化NF—rd3、 NF．rd3抑制蛋白亚基(I．KB)、脂肪酸结合蛋白5(FABP5)、过氧化物酶体增殖物 激活受体13／8(PPAR]3／8)的蛋白水平。 2．体外实验 提取人正常肝细胞L02和肝癌细胞Hep3B的总蛋白质，Western blot方法检 测p-P13K、P13K、p-AKT、AKT、I-v,：B的蛋白水平。用P13K、AKT抑制剂处理 Hep3B细胞，检测FABP5的蛋白表达水平。 结果： 1．体内实验 (1)病理检测结果表明：Ras癌基因诱导了Ras雄性小鼠的多发性肝肿瘤， 万方数据 大连医科大学硕士学位论文体积较大，直径三 大连医科大学硕士学位论文 体积较大，直径三5 mm；病理切片的诊断结果表明，肝肿瘤组织与其周围正常 肝组织的界限清楚，肝肿瘤组织周围正常肝组织的2～3层肝细胞由于受到挤压 而呈现出梭形或纺锤形；肝肿瘤组织中的肝细胞分化良好，可见正常的肝小叶结 构，肝肿瘤细胞的胞质呈现出嗜碱性改变，肿瘤细胞出现肿胀变性，以及中等程 度的脂肪变性，部分肝肿瘤细胞内还可见嗜酸性包涵体。Ras转基因雄性小鼠的 肝脏没有发生炎症、肝纤维化、肝硬化的病理学特征。 (2)PPAR[3／6表达情况的检测：其中，从蛋白结果可知，正常雄性小鼠肝组 织、Ras雄性小鼠肝癌旁组织中PPAR6／a的蛋白表达水平显著高于Ras雄性小鼠 肝癌组织；正常雄性小鼠肝组织中PPARl3／6的蛋白表达水平高于癌旁组织。 RT-qPCR结果显示，PPAR[3／6在正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠的癌旁组织 及肝癌组织中呈逐步升高趋势，但无显著差异。 (3)信号通路检测结果表明：与正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠癌旁组 织相比，肝癌组织中ERK和P．ERK的蛋白水平都显著升高。与正常雄性小鼠肝 组织相比，Ras雄性小鼠癌旁组织中ERK的蛋白水平没有显著变化，而p-ERK 的蛋白水平却显著升高。与正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠癌旁组织相比， 肝癌组织中P13K、p-P13K、p-AKT、p-NF．v,B、核蛋白NF．r．B、FABP5的水平显 著升高，NF．KB、质蛋白NF．r．B、I．v．B、PPARl3／6的蛋白水平显著降低。癌旁组 织与正常雄性小鼠组织相比，p-P13K、NF—r,B、质蛋白NF．v．B、和I．心的蛋白 水平没有显著变化