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- 2018-12-22 发布于福建
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d3s3053d6s474d20s482d1gata113d2s176d4s2408 ministr基因座四色荧光分型体系的构建及法医学应用
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中文摘要
中文摘要 D3S3053,D6S474,D20S482,D1GATAll3,
D2S1776,D4S2408 miniSTR基因座四色荧光分型 体系的构建及法医学应用
摘 要
目的:自上世纪80年代以来,短串联重复序列(short tandem repeats,STR)遗传标记系统,由于在人类基因组中分 布广泛,高度的遗传多态性以及简单快捷的检测方法而成为 法庭科学鉴定中最常用、发展最成熟的技术,被广泛应用于 法医学等领域,STR数据成为各国法庭科学数据库的主要构 成。目前法医学主要运用常染色体STR基因座和线粒体DNA 遗传标记,能够解决大部分个体识别和亲权鉴定案例。然而, 在许多法医案例中,DNA样本由于各种原因而被高度降解或 被混入环境污染物,在使用商品化STR复合扩增试剂盒进行 检测时,片段较长的STR基因座往往无法进行有效的扩增, 片段检测不到信号,而这个问题随着PCR反应产生大量的 PCR产物而被扩大。miniSTR基因座分析技术在设计引物时, 使其尽可能靠近核心重复序列而缩短扩增片段长度,用于高 度降解的DNA样本检测可提高检测成功率。miniSTR基因座 被欧泖]DNA分型工作组(the european DNA profiling group, EDNAP)定义为继STR之后的新一代遗传标记。美国、日本、 西班牙、新加坡、韩国等国家也相继报道了miniSTR基因座 的群体遗传学数据及其法医学应用价值,而我国相关报道较 少并缺乏群体遗传学数据。本研究选取D3S3053,D6S474, D20S482,D1G触阪113,D2S1776,D4S2408等六个miniSTR基
中文摘要因座,调查其在中国汉族人群中的遗传多态性,并探讨其法
中文摘要
因座,调查其在中国汉族人群中的遗传多态性,并探讨其法 医学应用价值。
方法:采用天根血液基因组DNA提取试剂盒提取120份 河北汉族无关健康个体全血基因组DNA。将D20S482、 D2S1776两个基因座的上游引物5’端用6-FAM荧光标记, D3S3053、D1GATAll3两个基因座的上游引物5’端用HEX荧 光标记,D6S474、D4S2408两个基因座的上游引物5’端用 TAMRA荧光标记,对所有样本的六个miniSTR基因座进行 PCR复合扩增,其中D3 S3053、D6S474、D20S482_U_个基因 座进行复合扩增,D1GA]队113、D2S1776、D4S2408三个基 因座进行复合扩增。复合扩增反应体系为109l,分别加入各 个基因座特异性的引物,并设定适宜的退火温度,经28个循 环后,可得到各个基因座长度不等的等位基因片段。PCR复 合扩增产物在ABI PRISM 3 10基因分析仪上自动完成进样电 泳和电泳结果数据收集,结果用Genemapper 3.2计算扩增产
物片段相对大小并进行样本基因型分型。计算各基因座基因
频率及各法医学参数。选取本法医鉴定中心既往亲子鉴定的 家系样本9例,对6个miniSTR基因座进行遗传稳定性的研究。 提取同一尸体的心脏、肝脏、脾脏、肺组织、肾脏、脑组织、 肌肉组织、皮肤及尸体血痕检材进行组织同一性分析。将 9947A DNA样本稀释成lng、O.5ng、0.1ng、0.05ng进行灵敏 度检测。此外,将新鲜血液放置于夏季的自然环境中一周、 两周、四周和八周模拟降解检材,应用本研究构建的6个 miniSTR基因座荧光标记复合扩增分型体系及商品化常规 STR试剂盒进行DNA分型,比较二者分型的成功率。
结果:本研究建立了两组荧光复合扩增检测6个miniSTR
中文摘要基因座基因型的方法。复合扩增检测样本的分型结果显示,
中文摘要
基因座基因型的方法。复合扩增检测样本的分型结果显示, 六个miniSTR基因座等位基因
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