芥菜开花整合子soc1与开花抑制因子来svp flc蛋白相互作用.docx

研究生优秀毕业论文 西南大学硕士学位论文4．2_3 西南大学硕士学位论文 4．2_3 ∞a突变体扩增引物设计 ．．3l 4．2．4 基因SOCl突变体的构建 ．32 4．2．5 酵母双杂交系统筛选SOCl突变体与SVP相互作用位点 33 4．2．6 BiFC技术筛选SOCl突变体与SVP相互作用位点 ．．33 4-3 结果与分析 33 4．3．1 基因SOCl突变体的构建 ．33 4．3．2 SOCl突变体酵母表达载体的构建 ．．34 4．3．3 重组质粒的测序结果 34 4．3．4 自激活和毒性检测 35 4．3．5 BiFC重组表达载体的构建 36 4．3．6 SOCl突变体与SVP蛋白互作位点筛选 37 第五章芥菜SVP突变体构建及其与SOCl蛋白互作 41 5．1 材料 4l 5．2 方法 41 5．2．1 试验试剂的配制 4I 5．2．2 蛋白互作位点的预测 4l 5．2．3 SVP突变体扩增引物设计 41 5．2．4 SVP突变体的构建 42 5．2．5 酵母双杂交系统筛选SVP突变体与SOCl相互作用位点 42 5．3 结果与分析 43 5．3．1 SVP突变体的构建 43 5．3．2 SVP突变体酵母表达载体的构建 43 5．3．3 重组质粒的测序结果 43 5．3．4 自激活和毒性检测 44 5．3．5 BiFC重组表达载体的构建 45 5．3．6 SVP突变体与SOCl蛋白蛋白互作位点筛选 46 第六章SOCl与SVP蛋白互作强度分析 49 6．1 材料 49 6．2 方法 49 6．2．1 试验试剂的配制 49 6．2．2 13-半乳糖营酶活性测定 ．49 6．3 结果与分析 49 6．3．1 SOCl点突变与SVP蛋白互作强度分析 49 6．3．2 SVP点突变与SOCl蛋白互作强度分析 50 第七章讨论 5 1 7．1 芥菜SOCl与SVP及FLC蛋白互作研究 ．．5l 7．2 芥菜SOCl与SVP蛋白互作关键氨基酸位点预测及研究 51 第八章结论 53 8．1 成功亚克隆了芥菜SOCl基因 ．53 8．2 芥菜SOCl与SVP相互作用的鉴定 53 8．3 芥菜SOCl与FLC相互作用的鉴定 53 8．4 芥菜SOCl K域的5个突变体和SVP K域的4个突变体的构建 53 8．5 芥菜SOCl K域的5个突变体与SVP相互作用的鉴定 53 8．6 芥菜SVP K域的4个突变体与SOCl相互作用的鉴定 53 8．7 互作强度分析 54 参考文献 55 附i毛 6l 致{射 65 项目资助 67 在校期间发表论文 69 万方数据 摘要芥菜开花整合子SOCl与开花抑制因子SVP、FLC蛋白相互 摘要 芥菜开花整合子SOCl与开花抑制因子SVP、FLC蛋白相互 作用 蔬菜学硕士研究生：谷慧英 指导老师：宋明教授 汤青林研究员 摘要 开花是植物由营养生长转变为生殖生长的一个重要阶段，开花时间的早晚会影响产品器 官的产量与品质。芥菜开花整合子SUPPRESSOR OF CO OVERFAPRESSIONl(SOCl／)、开 花抑制因子FLOWERING LOCUS C纯C夕和SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)均编码 TypeIIMADS-box型MIKC蛋白，在调控植株发育以及开花时间上起着非常重要的作用， 但是它们调控芥菜开花时间的分子机制并不清楚。迄今为止，有关芥菜SOCl蛋白与SVP， FLC蛋白之间的作用机制仍未见报道。 为了深入研究芥菜SOCl蛋白与开花负调控因子SVP及FLC蛋白互作的分子机理，本 试验以‘青叶芥’为材料克隆了芥菜SOCl基因，构建了SOCl、SOCl突变体及SVP突变 体的酵母双杂交重组表达载体和BiFC重组表达载体，并通过B．半乳糖苷酶活性测定了蛋 白．蛋白相互作用强度，筛选并鉴定了SOCl分别与SVP，FLC蛋白的相互作用及其氨基酸 作用位点。为深入研究SOCl在开花时间调控网络中的作用机理奠定了基础。 主要试验结果如下： 1． 芥菜SOCl基因的亚克隆及生物信息学分析 以芥菜茎尖总RNA反转录eDNA第一链为模板，扩增得到SOCl基因的cDNA序列为 639 bp，编码213个氨基酸残基，属于MIKC型蛋白，与油菜和埃塞俄比亚芥的SOCl亲缘 关系最近。预测SOCl蛋白分子量大小为24．37 kDa，理论等电点为9．18。二级结构预测分 析可知，芥菜SOCl蛋白中由氨基酸残基形成的Ⅱ螺旋占整个氨基酸残基数56％，D折叠占 10％，卷曲螺旋占34％。 2． 芥菜SOCl与SVP相互作用检测 构建酵母表达载体pGBKT7．SOC 1，通过醋酸锂转化法将重组质粒转化到感受态酵母中 得到酵母转化子Y2HGold(pGBKT7．soco，经过毒性及自激活检测，