miRNA135a通过靶基因HOXA10促进乳腺癌细胞侵袭迁移能的研究.docxVIP

复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 英 文 缩 写 L N A L o ck ed n u cleic acid 锁 核 苷 酸 A m p A m picillin 氨节青霉素 K an K anam y cin 卡那 霉 素 L B L u ria-B ertan i m ed ia L B 培 养 基 T B T errific B ro th m ed ia T B 培 养 基 R T E T E b u ffe r w ith R N a se  复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 中 文 摘 要 中 文 摘 要 微 小 R N A (m iR N A ) 是 一 类 长 约 22nt、 非 蛋 白编 码 的功 能 小 R N A ，在 许 多 生物 中都有表达 。原初 转录本 （pri-m iR N A ) 经过核 内和 胞质 中一系列 的加工修 饰 后 形 成 成 熟 的m iR N A 。 成 熟 的 m iR N A 通 过 与 靶 基 因 3 ’U T R 区 形 成 不 完 全 的 配 对 ，抑 制 靶 基 因翻 译 ，或 形 成 接 近 完 全 的配 对 导 致 靶 m R N A 降解 ，从 而 调 控 靶 基 因 的 表 达 。一 个 m iR N A 具 有 调 节 不 同 的 多 个 m R N A 的 能 力 。目前 在 人 体 中 已发 现 6 50 多 个 m iR N A ， 调 控 超 过 1/3 的 人 基 因 组 中 的 编 码 基 因 。 m iR N A 与 多 种 恶 性 肿 瘤 的 发 生 和 发 展 密 切 相 关 ， 如 乳 腺 癌 、 脑 癌 、 慢 性 淋 巴细 胞 性 白血 病 、 结 肠 癌 、肝 癌 和 肺 癌 等 。 乳 腺 癌 是 成 年 女 性 高 发 的 恶 性 肿 瘤 ， 已发 现 有 多 种 m iR N A 的 表 达 异 常 。m iR N A 通 过 调 控 靶 基 因影 响 恶 性 肿 瘤 的 发 生 发 展 是 目前 的 研 究 热 点 。 //O LY基 因 编 码 的 转 录 因 子 在 发 育 过 程 中调 控 细 胞 分 化 ，对 胚 胎 形 成 、形 态 发 生 和 器 官 发 育 中至 关 重 要 。此 外 ，研 究 发 现 M M 基 因 在 多 种 恶 性 肿 瘤 中 表 达 异 常 ， 且 与 肿 瘤 的 生 长 、侵 袭 和 转 移 相 关 ， 因 此 被 认 为 是 重 要 的肿 瘤 相 关 基 因 。 我 们 的研 究 思 路 是 从 具 有 重 要 功 能 的M 3X 4仏 基 因 入 手 ，寻 找 可 能 调 控 它 的 m iR N A , 然 后 深 入 了解 它 们 在 乳 腺 癌 细 胞 中 的 功 能 和 作 用 机 制 。 第 一 部 分 H O X A IO 蛋 白在 高 侵 袭 性 乳 腺 癌 细 胞 （如 乳 腺 癌 M D A -M B -23 1细 胞 ）中通 常 低 表 达 或 不 表 达 ，但 m R N A 却 在 高 恶 性 乳 腺 癌 组 织 中表 达 水 平 增 高 。由 此 推 论 ，//(9X 4 7 0 ■ 可 能 在 转 录 后 受 到 调 ?? ，而 最 有 可 能 的 调 控 因 素 是 m iR N A 。 但 迄 今 没 有 关 于 //Q X 4 7 0 受 m iR N A 调 控 的 报 道 。 经 生 物 信 息 分 析 预 测 以 及 实 验 验 证 ， 我 们 发 现 同 源 盒 基 因 //(? ? 川 是 m iR -13 5 a 的 靶 基 因 之 一 。 在 高 侵 袭 的 乳 腺 癌 细 胞 B T 54 9 中 ，H O X A I O m R N A 与 m iR -13 5a有 共 分 布 。 为 了 明 确 m iR -13 5a对 //0 X 4 川 的 调 控 机 制 ， 我 们 应 用 体 外 3 U T R L uciferase 报 告 基 因 检 测 方 法 ，发 现 m iR -13 5a能 显 著 抑 制 //Q X 4/ 0 的 表 达 ; 通 过 定 点 突 变 ，我 们 确 定 了m iR -135a与 //9X 4川 3 ’U T R 区 域 的 结 合 位 点 。 之 后 ， 我 们 发 现 m iR -135aXt ^ O X 4M 的 抑 制 不 仅 发 生 在 蛋 白翻 译 水 平 ，而 且 也 发 生 在 转 录 水 平 ，可 以 导 致 //0 X 4 70 m R N A 的 降 解 。 第 二 部