猪主动脉瓣膜中NADPH氧化酶2和4的表达.PDFVIP

·７３４· 郑州大学学报（医学版）　２０１８年 １１月　第５３卷　第６期 ｄｏｉ：１０．１３７０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１６８２５．２０１８．０３．００９ 猪主动脉瓣膜中ＮＡＤＰＨ氧化酶２和４的表达 潘亚婷，刘慧兵，王立波，王　蕾，冷小敏，吕　诚，王学惠，赵国安，张　敏 新乡医学院第一附属医院心内科；新乡医学院心血管病诊疗中心 河南卫辉 ４５３１００ 关键词　ＮＡＤＰＨ氧化酶；猪；主动脉瓣膜；间质细胞；内皮细胞 中图分类号　Ｒ５４２．５２ 摘要　目的：检测 ＮＡＤＰＨ氧化酶（Ｎｏｘ）在正常猪主动脉瓣膜及培养的瓣膜间质细胞和内皮细胞中的表达。 方法：把猪主动脉瓣膜分为尖部、中部和根部，并从完整瓣膜中分离培养瓣膜间质细胞和内皮细胞。通过免疫荧光 法鉴定间质细胞和内皮细胞的表型及组织中 Ｎｏｘ主要亚型 Ｎｏｘ２和 Ｎｏｘ４的表达，采用 ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测瓣膜尖部、中部和根部以及间质细胞和内皮细胞中Ｎｏｘ２和 Ｎｏｘ４的表达。结果：与尖部和中部相比， 猪主动脉瓣膜根部 Ｎｏｘ２和 Ｎｏｘ４蛋白表达水平升高（Ｐ＜０．０５）；内皮细胞中Ｎｏｘ４ｍＲＮＡ和蛋白的表达水平高于间 质细胞（Ｐ＜０．０５），但间质细胞中Ｎｏｘ２蛋白表达水平高于内皮细胞（Ｐ＜０．０５）。结论：Ｎｏｘ在猪主动脉瓣膜的生理 性表达具有组织和细胞特异性。 ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅ２ａｎｄ４ｉｎｎｏｒｍａｌｐｏｒｃｉｎｅａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅｓ ＰＡＮＹａｔｉｎｇ，ＬＩＵＨｕｉｂｉｎｇ，ＷＡＮＧＬｉｂｏ，ＷＡＮＧＬｅｉ，ＬＥＮＧＸｉａｏｍｉｎ，ＬＹＵＣｈｅｎｇ，ＷＡＮＧＸｕｅｈｕｉ，ＺＨＡＯ Ｇｕｏａｎ，ＺＨＡＮＧＭｉｎ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＣｅｎｔｅｒｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕ ｌａｒＤｉｓｅａｓｅ，ＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｈｕｉ，Ｈｅｎａｎ４５３１００ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅ；ｓｗｉｎｅ；ａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅ；ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｅｌｌ；ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｉｍ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅｓ（Ｎｏｘ）ｉｎｎｏｒｍａｌｐｏｒｃｉｎｅａｏｒ ｔｉｃｖａｌｖｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｐｏｒｃｉｎｅａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｐａｒｔｓ：ｔｈｅｔｉｐ，ｍｉｄｄｌｅ，ａｎｄｒｏｏｔ．Ｐｒｉｍａｒｙｖａｌｖｕｌａｒｉｎ ｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｅｌｌ（ＶＩＣ）ａｎｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ（ＥＣ）ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ，ｃｕｌｔｕｒｅｄ，ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．ＴｈｅｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｏｆｍａｉｎ ＮｏｘｉｓｏｆｏｒｍｓＮｏｘ２ａｎｄＮｏｘ４ａｎｄｔｈｅｉｒｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅｓａｎｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，ａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｏｆＮｏｘ２ａｎｄＮｏｘ４ｗｅｒｅｂｏｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎ ｔｈｅｒｏｏｔｏｆｖａｌｖｅｓｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｉｎｔｈｅｔｉｐａｎｄｍｉｄｄｌｅｐａｒｔｓ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＶＩＣ，ｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＮｏｘ４ｍＲＮＡ ａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｍａｒｋｅｄｌｙｈｉｇｈｅｒ，ｂｕｔＮｏｘ２ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎＥＣ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮｏｘ２ａｎｄＮｏｘ４ｉｎｎｏｒｍａｌｐｏｒｃｉｎｅａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅｓａｒｅｔｉｓｓｕｅａｎｄｃｅｌｌｓｐｅｃｉｆｉｃ． 　　钙化性主动脉瓣膜病（ｃａｌｃｉｆｉｃａｏｒｔｉｃｖａｌｖｅｄｉｓ （ＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅｓ，Ｎｏｘ）是一特殊的产生 ＲＯＳ的酶