基于pamam联合包载sirna与ptx靶向给药系统的构建-药剂学专业论文.docxVIP

基于 P 基于 PAMAM 联合包载 siRNA 与 PTX 靶向给药系统的构建 中文摘要 I I PAGE PAGE IV 基于 PAMAM 联合包载 siRNA 与 PTX 靶向给药系统的构建 中文摘要 目的：本文以 PAMAM 为载体，以具有主动靶向功能的 HA 为被膜材料，构建 PAMAM/HA 用于递送靶向 VEGF mRNA 的 siRNA，诱导 RNAi，通过抗血管生成控 制肿瘤生长。由于单一的抗血管生成疗法无法快速、完全消除肿瘤及 PAMAM/HA 无 法完全避免体内 RES 吞噬作用的缺陷，在上述复合物的基础上，将 HA 进行 PEG 化 后包覆 PAMAM 用于联合递送靶向 VEGF 的 siRNA 和抗肿瘤化疗药物 PTX，构建兼 具靶向及长循环双重功能的联合载药系统 siRNA/PTX/PAMAM/HA-PEG，以期增强体 内抗肿瘤作用，实现低毒高效的抗肿瘤效果。 方法：本文构建了不同HA包覆修饰量的siRNA/PAMAM/HA（SPH）复合物，琼 脂糖凝胶电泳进行siRNA阻滞实验，激光粒度分析仪测定粒径及电位，MTT法测定细 胞毒性，采用荧光显微镜和流式细胞仪对复合物的摄取进行考察，从而筛选出最佳的 HA包覆量。通过酰胺化反应合成HA-PEG，经纯化后通过1H-NMR对产物结构进行表 征 。 通 过 静 电 吸 附 及 物 理 包 埋 法 构 建 siRNA 和 PTX 共 递 送 的 复 合 物 载 药 系 统 siRNA/PTX/PAMAM/HA-PEG（SPPG），通过siRNA阻滞实验、稳定性实验、粒径、 电位、形貌和包封率等对复合物进行表征。MTT法测定细胞毒性，流式细胞仪、HPLC 定量考察复合物的摄取情况，RT-PCR测定复合物的RNAi效果，通过流式细胞仪和共 聚焦显微镜分别考察复合物的内吞机制和细胞内定位。采用小动物活体荧光成像技术 观察复合物在体内的分布情况。 结果：激光粒度分析仪测定结果表明，随着HA包覆比例的增加，SPH的粒径增 加，zeta电位降低。MTT和细胞摄取实验表明，HA的包覆使复合物的细胞毒性下降； HA的包覆能增加细胞对该复合物的摄取，增强复合物的主动靶向性，并且当HA的包 覆量为25%（电荷比）时，细胞摄取量最高。1H-NMR检测结果显示成功合成HA-PEG。 siRNA/PTX/PAMAM（SPP）、siRNA/PTX/PAMAM/HA（SPPH）、siRNA/PTX/PAMAM 中文摘要 基于 PAMAM 联合包载 siRNA 与 PTX 靶向给药系统的构建 /HA-PEG（SPPG）的粒径依次增大，电位降低。细胞实验表明，HA的包覆使细胞对 复合物的摄取最高，RNAi效果最强；而HA-PEG的包覆摄取虽然比未有包覆的复合物 低，RNAi效果二者却未有明显差异。摄取机理研究结果表明，三种复合物的细胞摄 取均为能量依赖的转运过程，SP经网格蛋白途径入胞，SPH及SPG经网格蛋白及小窝 蛋白多种途径入胞。动物实验表明，SPPH及SPPG均可不断向肿瘤部位蓄积，具有主 动靶向功能；且SPPG能够在肿瘤部位获得较长时间的累积，具有一定的长循环作用。 结论：本文以PAMAM为载体，通过合成HA-PEG，构建了毒性较低的用于siRNA 及PTX共递送的载药系统SPPG，在保留HA主动靶向的基础上，兼备了长循环功能， 将基因疗法与传统的化疗相结合，有望实现较高的体内抗肿瘤作用。 关键词：PAMAM；透明质酸；靶向递药；聚乙二醇；siRNA；紫杉醇 作 者：张 璐 指导老师：陈大为 Pre Preparation of PAMAM Dendrimer-based System for Targeted and Co-delivery of siRNA and PTX Abstract Preparation of PAMAM Dendrimer-based System for Targeted and Co-delivery of siRNA and PTX Abstract Objective: In this paper, G4 PAMAM dendrimers were used for the delivery of siRNA targeting VEGF mRNA, with HA as coating material for active targeting, to control the tumor growth by anti-angiogenesis. However, anti-angiogenic gene therapy can not eliminate tumor quickly and completely. Besides,