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基因工程难点解析及典题研析 基因工程知识体系 难点和考点 一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶　　识别特定序列，特定位点切割  【例题】已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如下图中箭头所指,如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该酶酶切后,这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是 （ ）　　A.3 B.4 C.9 D.12 【解析】只看一个切点，可得到a和bcd或ab和cd或abc和d（6种片段），如果看两个切点的话，会在一个切点的基础上再产生b或c或bc（3种片段），如果看三个切点的话，没有新片段产生，因此应选C。【答案】C （1）图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是TCGA，N端伸出的核苷酸的碱基序列是TGCA，则构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶 　▲　 ，再对 ▲ 进行切割。 （2）若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，根据图表中的信息分析，采用BamHⅠ和PstⅠ酶切，可得到 　▲　 种DNA片断。 （5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到______种DNA片断。②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到______种DNA片断。 (1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有 ▲ 种DNA片段。 (2)图中②表示HindⅢ与BamⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得 ▲ 种重组质粒；如果换用BstⅠ与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得 ▲ 种重组质粒。 二、“分子缝合针”——DNA连接酶 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 【例题】将抗虫棉的基因导入到受体细胞后，发生了如下过程：此过程中用到的条件包括 ( )①解旋酶 ②DNA聚合酶 ③DNA连接酶 ④限制酶 ⑤RNA聚合酶 ⑥4种核苷酸 ⑦5种核苷酸 ⑧8种核苷酸　A.②、⑤、⑥ B.①、⑤、⑥　C.①、⑤、⑦ D.④、⑤、⑥ 三、蛋白质工程 【例题】胰岛素可以用于治疗糖尿病，但是胰岛素被注射到人体后，会堆积在皮下，要经过较长的时间才能进入血液，而进入血液的胰岛素又容易分解，因此，治疗效果受到影响。如图是用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程，请据图回答有关问题：（1）构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，图中构建新的胰岛素模型的主要依据是 。 四、目的基因的检测和表达 五、基因工程与细胞工程、胚胎工程的综合 植物：受体细胞一般是植物体细胞　　　生产转基因植物（如抗虫植物）或药物（如紫草素等）动物：受体细胞常是受精卵或早期胚胎　　　生产转基因动物（能合成人生长激素的转基因鲤鱼）或生物反应器（转基因小鼠尿液中提取人生长激素）或基因治疗微生物：受体细胞多为大肠杆菌　　　大量生产基因控制合成的特定蛋白质 【例题】最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：（1）基因转移时，通常要将外源基因转入 　　 中，原因是 。（2）为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的 转入 细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体，该技术称为 。【答案】（1）受精卵（或早期胚胎） 受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞中表达（2）细胞核 去核的卵 核移植（或克隆） * 南京市第十三中学　高学林 南京高三复习名师答疑 黏性末端 黏性末端 切点 切点 AGCCCTCGGG DNA限制酶作用于磷酸二酯键DNA连接酶作用于磷酸二酯键DNA聚合酶作用于磷酸二酯键RNA聚合酶作用于磷酸二酯键DNA解旋酶作用于氢键 　　蛋白质工程是在基因工程基础上，延伸出的第二代基因工程 联系 只能生产自然界已存在的蛋白质 可以合成自然界不存在的蛋白质 结果 定向改造生物的遗传特性，以获得符合人类需要的生物类型会生