双抗体夹心ELIsA定量检测IL2HsA融合蛋白-中国药科大学学报.PDF

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１０，４１（２）：１７５－１７９ １７５ 双抗体夹心ＥＬＩＳＡ定量检测ＩＬ２ＨＳＡ融合蛋白 １ １ １ ２ ２ １ 张红梅 ，李　波 ，段作营 ，雷楗勇 ，金　坚 ，李华钟 １ ２ （江南大学　 教育部工业生物技术重点实验室；医药学院，无锡２１４１２２） 摘　要　以抗人ＩＬ２多克隆抗体为包被抗体，以ＩＬ２ＨＳＡ融合蛋白为夹心抗原，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的抗 ＨＳＡ单克隆抗体为检测抗体，建立了一种定量测定完整的ＩＬ２ＨＳＡ融合蛋白的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。包被抗体和检测 抗体的最佳工作浓度分别为为２ ｇ／ｍＬ和０５ ｇ／ｍＬ，方法的线性检测范围３９０６～１２５０ｎｇ／ｍＬ，标准曲线回归方程为ｙ＝ μ μ ０４４２９ｘ－１１４３３，ｒ＝０９９６６，灵敏度可达１０２５ｎｇ／ｍＬ，批内、批间变异系数分别为６４０％和７８１％，发酵上清液中回收 率为９８１３％～１０２９４％，与ＩＬ２、ＨＳＡ基本无交叉反应，健全性分析表明发酵液及小鼠血清组分及稀释倍数对该方法无 影响。该方法可用于该融合蛋白的发酵过程优化、分离纯化工艺、后期药动学、临床研究等的定量检测。 关键词　双抗体夹心ＥＬＩＳＡ；定量分析；融合蛋白；白介素２人血清白蛋白 中图分类号　Ｒ３９２１１　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１０）０２－０１７５－０５ ＡｎｅｗｓａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＩＬ２ ＨＳＡ １ １ １ ２ ２ １ ＺＨＡＮＧＨｏｎｇｍｅｉ牞ＬＩＢｏ牞ＤＵＡＮＺｕｏｙｉｎｇ牞ＬＥＩＪｉａｎｙｏｎｇ牞ＪＩＮＪｉａｎ牞ＬＩＨｕａｚｈｏｎｇ １ ２ ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牗ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ牘牷ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ牞ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｗｕｘｉ２１４１２２牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＡｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＩＬ２ＨＳＡ ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇａｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｏｈｕｍａｎＩＬ２ｆｏｒｃａｐｔｕｒｅａｎｄａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｔｏＨＳＡｗｉｔｈ ＨＲＰｌａｂｅｌｅｄｃｏｎｊｕｇａｔｅｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｉｒｓｔｃｏａｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉ ｂｏｄｙｗｅｒｅ２ ｇ／ｍＬａｎｄ０５ ｇ／ｍＬ牞ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙＲｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｉｎｅａｒｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｗａｓ牶ｙ＝ μ μ ０４４２９ｘ－１１４３３ｗｉｔｈａｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆ０９９６６牞ａｎｄｔｈｅｌｉｎｅａｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ３９０６ｎｇ／ｍＬ ｔｏ１２５０ｎｇ／ｍＬＲｅｃｏｖｅｒｙｆｒｏｍｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｗａｓ９８１３％ ｔｏ１０２９４％Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｉｔｈａｄｌｉｔｔｌｅｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈＩＬ２ａｎｄＨＳＡＴｈｅｓｏｕｎｄｎｅｓｓａｎａｌｙｓｉｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｆｅｒｍｅｎ ｔａ