植物组织石蜡切片的制作.ppt

植物组织石蜡切片的制作 一、实验目的 1．熟练掌握石蜡切片的方法。 2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。 3．学会植物内部结构的比较研究方法。 二、实验器具与试剂 1．器具 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2．试剂 10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 三、实验材料 幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。 四、实验内容与方法 石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。全都过程如下： 1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片 7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封 实验二 1、石蜡切片技术—固定、染色 一、实验目的： 掌握制作石蜡切片中固定、染色、返蓝的基本操作技术 二、实验原理： 石蜡切片法：是用石蜡浸透到组织中，并包埋组织，然后用旋转切片机将蜡块切成切片。只是切片中最常用的一种方法。 三、实验用品： 1．实验材料：瓜叶菊叶柄，长寿花幼茎。 2．实验试剂：卡诺固定液、FAA固定液、35%酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、中性树胶、2% 氨水、爱氏苏木精染液。 3．实验器具：解剖器，双面刀片，青霉素小瓶。 四、实验步骤： 1．取材：依据生物组织取材的各项注意事项。 2．固定：卡诺固定液、FAA固定液固定24小时。 3．复水：卡诺固定液（1h）→50%酒精（1h）→爱氏苏木精染液 FAA固定液→爱氏苏木精染液 4．染色（整染）：爱氏苏木精染液染色，染色时间视材料不同而有所不同，总之使材料最后染指红棕色为止，且内外均染色均匀。对于染不好的材料，可加长染色时间，还可通过负压，超声波加注浸剂等方法提高染色效率。时间为1-2天。 5．返蓝：染好的材料，用自来水冲洗，加2% 氨水使材料变为蓝色，时间也因材料的不同而有所不同，好返蓝的材料用水一洗就蓝。 附：分染：番红与固绿色法番红用l％的水溶液，固绿用0.5％的酒精液(用95％的酒精配制)，染色步骤如下： 讨论和注意点： (1) 用番红和固绿这个组合染成的切片，木化、栓化和角质的细胞壁，被番红染成鲜红色，纤维素的细胞璧，被固绿成绿色。就维管束来讲，木质部染红，韧皮部染绿，区别极清楚。 (2) 在50％酒精中脱色，需经实践，如脱色不够，绿色难得染好，脱色太过分，做出来的切片，红色太淡，甚至于全是绿色，失掉了二色染法的用意。 实验二 2、石蜡切片技术—脱水、透明、浸蜡、包埋 一、实验目的： 掌握制作石蜡切片中脱水、透明、浸蜡、包埋的基本操作技术。 二、实验用品： 1．实验试剂：35%酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蜡。 2．实验器具：电光纸、电热恒温箱、烤片机、解剖器、盆。 三、实验步骤： 1．脱水：35%酒精→50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级1-2h。70%酒精处可长期保存。 2．透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精 (1-2h) →纯二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h) 3．浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于38℃温箱中，放置2-4小时。 4．包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。 实验二 3、石蜡切片技术—切片、粘片、脱蜡、透明、封藏 一、实验目的： 掌握制作石蜡切片中切片、粘片、脱蜡、透明、封藏的基本操作技术。 二、实验用品： 1．实验试剂： 95%酒精、100%酒精、二甲苯、蒸馏水、加拿大树胶。 2．实验器具：切片机、烤片机、解剖器、载玻片、盖玻片、酒精灯、木筷、染色缸。 三、实验步骤： 1．修块、粘块、整修的步骤： ①选取所要切片的材料，从包埋的石蜡块上用单面刀片切割下来，注意不可损伤包埋的组织。 ②确定切面的方位，用刀片将石蜡块的四面作初步的整修。保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。 ③点燃酒精灯，并准备一把旧的解剖刀。 ④左手大拇指与食指间持整修好的石蜡块，材料向上用其余三指夹住台木。此时将解剖刀在酒精灯上加温后，即放在台木与石蜡块之间，因解剖刀已加温，遇上两面的石蜡都会融化，可立即将解剖刀抽出