血吸虫病三免疫诊断技术规范.ppt

结果判断 目测判读结果 B1-7,10-11,D1-2为正常血清， B8、9,12及D3、4为血吸虫病人血清； D5阴参，D6临界，D7阳参，D9空白 病人血清 阴参 临界 阳参 正常人血清 * 结果判断 加2M H2SO4后 * ELISA结果 B1-7,10-11,D1-2为正常血清， B8、9,12及D3、4为血吸虫病人血清； D5阴参，D6临界，D7阳参，D9空白 测定OD值 * 5 注意事项 1）试剂盒在2-8℃保存，冰冻失效、温度过高保存活性降低。每次取出时先平衡至室温后使用。滴瓶每次用后一定要将盖拧紧，各瓶盖之间切不可混用。各试剂盒之间不可混用。 2）洗涤时将蒸馏水加满孔内，每次停放30秒钟后，甩去孔内液体。禁用自来水等其他水源。 3）为提高实验的可比性建议使用仪器判读结果，并对阴性对照测复孔以减少误差。 4）洗涤要彻底，特别是酶结合物反应后，洗涤一定要充分； 5）OPD对光非常敏感，应避光反应；结果应尽快检测 6）酶标反应均应在湿盒中进行。 六、斑点免疫金渗滤法（DIGFA）操作规程 1 试验原理 将抗原（日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA）包被于硝酸纤维素薄膜 (微孔滤膜)上,滴加在膜上的待检血清通过滤膜时，其中的抗体与膜上的抗原相接触，起到亲和层析的浓缩，形成抗原抗体复合物。然后，红色胶体金颗粒标记的第二抗体所形成的金标探针，与复合物中的抗体结合，滞留在反应板上，形成肉眼可见的红色斑点。 3 实验操作准备 1) 穿戴好工作服、口罩和手套，做好基本实验准备工作。 2) 实验试剂和器材检查和摆放。要求试剂批号与有效期检查符合产品说明；器材符合相关质量要求。 3) 检查完毕后，按照实验常规要求摆布好实验试剂和器材。 4）实验试剂盒： 1）预处理空白反应板(含质控点) 2）洗涤液 3）金标抗体液 4）使用说明书 5）器材： 1. 移液器50μl、200μl吸头、吸头盒及移液器架 2. 实验记录纸、记录笔、记号笔。 6）被检样血清检查，要求：本方法对待检血清要求高，要仔细检查，详见注意事项。 4 操作程序 1） 将试剂盒、试剂取出，置予室温下平衡 2） 样本编号：样本编号1～n号，从左到右按1～n号排列，并作好记录。 3） 取n块预处理空白反应板(含质控点)放好并编号。 4） 按顺序每次取2块板，依次在反应孔中间位置加入2滴洗涤液，待液体完全渗透 5） 依次在每块板反应孔正中间垂直加入25μl新鲜特检血清（对应编号），待血清完全渗透。 （关健操作：1、如没完全渗透就加液可呈假阴性，但过干后再加液则呈假阳性。2、完全渗透的标准是膜上特别是孔周边折光液体消失） 6） 依次在每块板加入2滴洗涤液，待液体完全渗透。 7） 依次在每块板加入4滴金标抗体液，待液体完全渗透。 8） 依次在每块板加入2滴洗涤液，待液体完全渗透，观察结果。 9） 按顺序取下一轮2块板，同上进行第3和第4份、第5和第6份、……样本检测。 10） 样品全部检测完成后复查结果（但必须控制在1小时内），并记录。 11）清理台面，移液器调至最高档。 5 结果判断 判断结果的时间应以完成操作后，即时观察为准。部分品种在放置数小时或1日后，结果会发生变化 1）出现两个红色圆点为阳性； 2）出现一个红色圆点为阴性； 3）无圆点（呈白板状）表示试剂失效或操作有误，应当重新测试 6 注意事项 1）本试验对血清标本要求高，最好应用新鲜血清。测定血清标本要求离心分离以消除血脂的影响(4000转／分，15分钟或8000转l／分，5分钟)，不宜用未稍采血（塑料管法）样本。吸取血清标本时，应避开血脂、纤维蛋白或沉淀等，取其清亮透明部分。 2）试剂盒从冰箱取出后应恢复至室温才能使用，试剂盒最佳使用温度是30～37℃。 3）以2个样本为一批依次进行操作。血清样品加样时，应在反应孔的正上方垂直加样。 4）待反应板上的液体完全渗透后，立即加入下一种液体。既要防止渗透不全，又须避免反应膜干枯（是本试验操作的关键）。在加液时应避免出现气泡，尤其是金标液。 5）判断结果以即时观察为准．若较长期保存，将反应板正面朝下放置即可。 6）于2-8℃冷藏保存，切勿冷冻应当避免强烈光照和高温。检测完毕后,未用的反应板要立即放入自封袋中密闭冷藏。 七、移液器的使用规程 1 量程的调节 在调节量程时，逆时针或顺时针按照正常的调节方法，旋转旋钮即可;在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。 2 枪头(吸液嘴)的装配 方法是将移液枪(