食品微生物实验备课笔记..doc

备 课 用 纸 备 课 用 纸 PAGE PAGE 35 食品微生物实验 备课笔记 吴君艳 江苏食品职业技术学院 2012年8月 实验一 普通的光学显微镜的构造和使用（2课时） 一、目的要求 1、了解显微镜的构造、性能及原理 2、掌握显微镜的基本使用技术和保养方法 3、掌握显微镜（油浸镜）观察、识别细菌基本形态的方法 二、实验器材 菌种：霉菌标片、大肠杆菌染色标本片、金黄色葡萄球菌标本片 试剂：香柏油、二甲苯 仪器及其他：显微镜、擦镜纸 三、方法与步骤 1、低倍镜观察 先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。 2、高倍镜观察 　　显微镜的设计一般是共焦点的。低倍镜对准焦点后，转换到高倍镜基本上也对准焦点，只要稍微转动微调即可。 3、油浸镜观察 　油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离）很短，一般在0.2mm以内，因此使用油浸物镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使物镜受损。 使用油镜按下列步骤操作： （1）先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2cm，并将高倍镜转出。 （2）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 （3）从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。 （4）从接目镜内观察，放大视场光阑及聚光镜上的虹彩光圈，使光线充分照明。用粗调节旋钮将载物台徐徐下降，当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。 （5）观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许二甲苯，擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注意向一个方向擦拭）。 4、结束后，将显微镜各处擦拭干净，套上镜罩后方可离开。 四 绘图说明根霉菌标准片中观察到的细菌的形态特征。 五、思考题 1、油镜完毕后，镜头应如何处理? 2、什么叫工作距离？ 实验二 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定（2课时） 实验目的 进一步熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了解酵母菌的形态结构。 掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。 二、实验器材 菌种：酵母菌标准片，酵母菌菌悬液。 染色液或试剂：革兰氏染色用碘液，0.1％吕氏碱性美兰染色液 仪器和其他：显微镜、载玻片，盖玻片、镊子 三、方法与步骤 酵母细胞的形态观察 （1）酵母菌水-碘液浸片的制作：取一洁净的载玻片，用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载波片中央，然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡。 （2）镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。用同样的方法观察其他酵母菌标本片。观察是注意酵母菌细胞的形状和出芽情况。 死活酵母细胞的染色鉴别 取美兰染色液一滴，滴在载玻片中央，再加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5min后加盖玻片镜检。未被染色的是活细胞，被染成蓝色的是死细胞。 四、绘图说明所观察到的酵母菌的形态特征。 五、思考题 1、如何鉴别死活酵母菌？ 实验三 酵母菌细胞数的测定（2课时） 一、目的要求： 了解血球计数板测定微生物数量的原理。 了解血球计数板的结构，学习并掌握利用血球计数板进行酵母菌记数的方法，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。 二、实验原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值。后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。 三、实验器材 菌种 酵母菌液 仪器 显微镜，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸等 四、操作方法 酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。 计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。（本实验用） 2、酵母菌菌数量的测定 (1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。 (2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。 (3) 静置约5