基于ITS2序列构建10种常见中药材种子DNA条形码鉴定体系-药学专业论文.docxVIP

Dissertation for Master’s Degree of Fujian Agriculture and Forestry University Construct the DNA Barcoding Identification System for 10 common seeds of traditional Chinese medicinal materials based on ITS2 sequence Discipline： Medicine Science Subject: Pharmaceutical Science Specialty： Pharmacognosy Research Field： Study on Natural products active ingredient and structure-activity relationship Candidate: Chen Jun Supervisor: Prof. Wu Zhenhong Prof. Song Jingyuan Submitted Date： April, 2015 独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 □ 不保密，本论文属于不保密。 □ 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 指导教师亲笔签名： 日期： 目录 摘 要I AbstractII 第一章 引言 1 1.1 种子鉴定方法现状2 1.1.1 形态学鉴定3 1.1.2 理化法鉴定4 1.1.3 细胞生物学与分子生物学鉴定 5 HYPERLINK \l _TOC_250005 1.2 DNA 条形码研究概述 8 HYPERLINK \l _TOC_250004 1.2.1 DNA 条形码的原理 8 HYPERLINK \l _TOC_250003 1.2.2 DNA 条形码的研究现状 8 HYPERLINK \l _TOC_250002 1.2.3 中草药通用 DNA 条形码——ITS2 研究近况 10 HYPERLINK \l _TOC_250001 1.2.4 DNA 条形码的优点与局限性 11 HYPERLINK \l _TOC_250000 1.2.5 DNA 条形码的鉴定工具简介 12 1.3 本课题的研究目的和意义13 第二章 基于 ITS2 序列的中药材种子鉴定体系构建 15 2.1 材料 15 2.1.1 取样方法15 2.1.2 样品处理15 2.1.3 仪器与试剂16 2.2 方法 17 2.2.1 种子 DNA 提取 17 2.2.2 DNA 序列扩增及测序 21 2.2.3 DNA 序列分析与鉴定 25 第三章 基于 ITS2 序列的 10 种常见中药材种子分子鉴定 29 3.1 柴胡 29 3.2 秦艽 34 3.3 党参 38 3.4 甘草 43 3.5 吴茱萸 48 3.6 枸杞子 53 3.7 红花 57 3.8 板蓝根 61 3.9 当归 65 3.10 牛膝 69 第四章 结论与讨论73 4.1 中药材种子 DNA 条形码鉴定体系的独创性73 4.2 中药材种子 DNA 提取质量分析 74 4.3 DNA 条形码技术在中药材种子鉴定中的意义及前景 75 参考文献 77 致 谢 82 摘 要 我国中药材种类繁多，资源丰富，但是中药材资源的过度开发致使大面积植 被被毁，野生资源逐渐减少，中药材资源正面临着可持续发展困难的危机。因此， 对中药材进行人工栽培以保持物种的延续性，并满足市场需求，将是发展中药产 业的一个重要环节。企业投资建设中药材种植基地频频兴起，中药材种植面积的 扩大，必然需要优质且基原正确的种源，其在中药材种植过程中起着举足轻重的 作用。DNA 条形码技术（DNA Barcoding）是近几年来国际物种鉴定领域迅速发 展起来的新技术，该技术具有便捷、准确、科学性强、可重复性高