外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖,凋亡及b-catenin表达的影响.docVIP

外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖、凋亡及?-catenin表达的影响 陈英华，卫佳，李星星，吴丽美，马闻，张彦，何通川，周兰基金项目：国家自然科学基金资助项目 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者单位：1：重庆医科大学生物医学工程系、 重庆市生物医学工程学重点实验室、重庆市超声医学工程重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地 400016（陈英华，卫佳，李星星，吴丽美，马闻，张彦） 2：美国芝加哥大学医学中心分子肿瘤研究室 （何通川） 通讯作者：周兰，E-mail: HYPERLINK mailto:zhoulan0111@ zhoulan0111@ 重庆市渝中区医学院路1号重庆医科大学153信箱 400016 【摘要】目的：探讨外源性S100A6对骨肉瘤细胞株U2OS的生物学作用及其机制。方法：MTT法检测S100A6对U2OS细胞增殖的影响及浓度依赖性，台潘兰拒染法计数活细胞检测S100A6对U2OS增殖作用的时间依赖性，Hoechst染色检测细胞凋亡，Western blot法及免疫细胞化学法检测细胞内?-catenin的表达变化。结果：S100A6作用3d时，浓度为30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml和1000μg/ml的重组S100A6（GST-S100A6）组的OD值分别比相应浓度的GST对照组的OD值减少20.5%、23.7%、32.2%和36.8%，p0.05；蛋白浓度为100μg/ml 时，GST-S100A6组的细胞数在前2天与GST组相似，第3、4、5天的细胞数分别降低到GST组的59％、46％、48％，P0.05；，GST-S100A6干预3天后细胞凋亡率增高315.7%，P0.01；免疫细胞化学法测得经GST- S100A6处理72 h后β-catenin的平均光密度值比GST组增加22.9%，P0.01；经携带S100A6基因的重组腺病毒（Ad-S100A6）处理72 h后，Western blot法检测细胞中β-catenin的校正灰度值为1.4204±0.1999，比对照组（Ad-GFP组，0.9996±0.1000）显著增高， P0.01 结论：外源性S100A6能够抑制U2OS细胞的增殖、促进其凋亡和增加U2OS细胞中β-catenin水平。 关键词：S1OOA6，骨肉瘤，β-catenin 中图分类号：R730.231 Effect of exogenous S100A6 on human osteosarcoma cell line U2OS proliferation, apoptosis and β-catenin expression CHEN ying-hua，WEI jia，LI xing-xing，WU li-mei，MA wen，ZHANG yan，HE tong-chuan ，ZHOU lan 【Abstract】 Objective: we investigated the biological effects of exogenous S100A6 on osteosarcoma cell line U2OS and explored its possible mechanism. Method: MTT assay was used to determine S100A6 influence on U2OS cells proliferation and their concentration-dependent relationship. The trypan blue exclusion assay was used to observe S100A6 inhibitory effect on U2OS cells proliferation in a time-dependent manner; Hoechst staining was used to determine cell apoptosis; Western blot and immunocytochemical methods to determine expressions of cyto-β-catenin. Results: We found that ,on the first three days, OD values in cells subjected to the recombinant protein S100A6（GST-S100A6）with the concentrations of 30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml and 1000μg/ml respectiv