葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质-微生物学报.PDF

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2016, 56(8): 1242-1255 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Paper 研究报告 葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质 1, 2 2 * 1 杨家兴 ，王华明 ，路福平 1 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 2 中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308 摘要： 【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum) 中的β-甘露 聚糖酶(β-mannanase)基因。【方法】通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析，获得编码β-甘露聚糖酶基 因s16942和s331的序列信息，通过设计引物，PCR扩增得到基因s16942和s331 ，连接到载体pGm上，并 转化到黑曲霉中，获得的转化子经过amdS二筛平板复筛，测序验证，得到高效表达此基因的工程菌株 G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331 。【结果】SDS检测结果显示，G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表 达的蛋白分子量大小分别约为48 kDa和60 kDa ，且阴性对照中没有此条带。粗酶液的酶学性质表明， G1-pGm -s16942表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为60 °C ，最适反应pH为7 ，粗酶液的酶活最高达 521 U/mL ；G1-pGm-s331表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为50 °C ，最适反应pH为7 ，粗酶液的酶活 最高达84 U/mL。【结论】本研究首次将葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因转化到黑曲霉中并成功表达，并 且具有较高的活性。 关键词：β-甘露聚糖酶, 葡萄穗霉, 黑曲霉, 遗传转化, 重组蛋白表达 β-甘露聚糖酶(β-mannanase EC 8)是一 [4] 道微生物生态 、促进营养物质吸收、提高饲料 类能够水解含有甘露糖苷键的甘露聚糖(包括葡甘 [5–6] 利用率以及提高动物生产性能等 。目前已在动 露聚糖和半乳甘露聚糖等异甘露聚糖) 的半纤维素 物生产、饲料、食品、医药、石油开采以及生物 内切水解酶，以内切方式降解β-D-1,4-吡喃甘露糖 [7–8] 技术等多方面得到广泛应用 。因此人们对β-甘 [1] 苷键，降解产物的非还原末端为甘露糖 ，其主 露聚糖酶的深入研究越来越重视。 要水解产物为单糖、二糖、三糖、四糖等低聚 β-甘露聚糖酶的来源非常广泛，包括植物、 [2]