重组人胰岛素研究历史和生产工艺.pptVIP

重组人胰岛素的研究历史 和生产工艺 ——BY: 王腾 时佳 孙玉新 玛依努尔 据世界卫生组织统计，2011年全球糖尿病患者2.8亿，在中国，已突破9200万人，发病率达10%，同时由于老龄化等因素，国内还有9000多万的潜在糖尿病患者。加之中国糖尿病患者整体治疗率不足三成，且人均胰岛素使用量偏低，仅为美国糖尿病患者人均使用量的0.8%，所以中国胰岛素市场潜力巨大。 重组人胰岛素 胰岛素定义： 胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。 胰岛素结构： 胰岛素由A、B两个肽链组成。A链有11种21个氨基酸，B链有15种30个氨基酸，共26种51个氨基酸组成。其中A7(Cys)-B7(Cys)、A20(Cys)-B19(Cys)四个半胱氨酸中的巯基形成两个二硫键，使A、B两链连接起来。此外A链中A6(Cys)与A11(Cys)之间也存在一个二硫键。 Ins的性质 胰岛素的功能 稳定性 Ins在弱酸性水溶液中或混悬在中性缓冲液中较稳定 还原剂及多种重金属使Ins失活 紫外线、光氧化、超声波会引起Ins变性。 胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。 药理作用 治疗糖尿病、消耗性疾病。 重组胰岛素的研究历史 1982年----采用基因重组技术生产的人胰岛素正式上市。 1998年，成功研制出了中国第一支基因重组人胰岛素制剂“甘舒霖” 90年代至今----重组人胰岛 素类似物成功研发上市， 包括超短效和长效人胰 岛素类似物。  基因重组人胰岛素研 制成功 基因重组人胰岛素实验 中国胰岛素市场状况 放眼全球，胰岛素作为最重要的糖尿病治疗药物，在过去5年中取得了14%的复合增长率，2010年已达到145亿美元的销售额。但胰岛素市场高度集中于三巨头诺和诺德、礼来和赛诺菲安万特，三家公司占全球胰岛素90%以上的市场份额。 目前临床使用的胰岛素来源 1、动物胰岛素：从猪和牛的胰腺中提取，两者药效相同，但与人胰岛素相比，猪胰岛素中有1个氨基酸不同，牛胰岛素中有3个氨基酸不同，因而易产生抗体。动物来源的胰岛素（28种）  2、半合成人胰岛素：将猪胰岛素第30位丙氨酸，置换成与人胰岛素相同的苏氨酸，即为半合成人胰岛素。半合成来源的胰岛素（5种）  3、重组人胰岛素（现阶段临床最常使用的胰岛素）：利用生物工程技术，获得的高纯度的生物合成人胰岛素，其氨基酸排列顺序及生物活性与人体本身的胰岛素完全相同。基因重组来源的胰岛素（27种） 胰岛素给药方式的发展 一种新的注射给药方式:NIS泵 通过一条与人体相连的软管向体内持续输注胰岛素的装置。它模拟人体健康胰腺分泌胰岛素的生理模式。俗称“人工胰腺”。 维持血液中INS水平 缩短控制高血糖的时间 减少低血糖发生， 减轻病人多次皮下注射INS的痛苦 INS泵是强化治疗的最佳手段 人胰岛素分类 传统中长效胰岛素 长效人胰岛素类似物 速效人胰岛素类似物 非注射胰岛素 基因重组大肠杆菌生产重组人胰岛素工艺流程 酵母系统生产重组人胰岛素的工艺流程 发酵菌种 摇瓶种子培养 种子罐培养 生产罐发酵 微小胰岛素原溶液 离心除去菌体 超滤、离子交换吸附沉淀 纯化的胰岛素原 胰岛素粗品 胰酶和羧肽酶处理 离子交换色谱、分子筛色谱、二步反相色谱 重结晶、胰岛素纯品 酵母系统生产重组胰岛素 优点： 二硫键的结构与位置正确，不需要复性加工处理 缺点： 表达低，发酵时间长 表达载体结构基因组成：信号肽、前肽序列、MCS 和微小胰岛素原。 前肽序