猪原代皮肤角质形成细胞培养试剂盒.PDFVIP

猪原代皮肤角质形成细胞培养试剂盒 产品简介 本试剂盒主要用于猪原代皮肤角质形成细胞的培养，包含猪原代皮肤角质形成细胞基础培养 基 （Cat.No.IMT-CBM-6001）和F 细胞 （Cat.No.IMT-2001-1）两个组份。猪原代皮肤角质形成细胞基础 培养基是即用型培养基，包含猪原代皮肤角质形成细胞生长所需的多种生长因子，以及必需的氨基酸、维 生素、糖类、无机离子、微量元素等成分。在IMMORTECH 技术人员的标准操作流程下，该细胞可持续 传50代，仍能保持良好的细胞活性和原代细胞分化状态。 产品货号 IMT-K1-6001 产品品牌 IMMORTECH 产品规格 100mL 猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基+ 10 管F 细胞 产品用途 本产品只适用于实验研究，不适用于诊断和治疗。 运输条件 干冰运输 储存条件 猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基 （2-8 ℃避光）; F 细胞 （液氮） 使用方法 本方法以T25cm²透气细胞培养瓶为例说明，如为其它规格的细胞培养器皿，请相应的增加或减少细胞培 养基、胰酶等用量。 猪原代皮肤角质形成细胞的初次分离： （1） 复苏冻存的F 细胞，37℃水浴旋转速溶，转移入含有9mL PBS 缓冲液 （不含钙镁离子）的15mL 离心管中，低速离心 （1000rpm，室温）4min。 （2）吸弃上清液，将F 细胞重悬于1-2mL 猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基中形成单细胞悬液。（3） 转移到T25 中，将培养基体积补至4-5mL，轻轻晃动细胞培养瓶，使F 细胞均匀铺在培养瓶中，置于培养 箱 （37℃，5%CO ）贴壁5 小时以上或过夜，确保F 细胞贴壁量达70%T25细胞培养瓶以上。 2 (★ 若F 细胞贴壁量不足70%T25cm²细胞培养瓶，需按缺少的量补加新复苏的F 细胞，使F 细胞贴壁量 达70%T25cm²细胞培养瓶以上，再进行后续实验操作。) （4） 若有漂浮的F 细胞，则更换新鲜猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基；若没有漂浮的F 细胞，则无 需更换。 （5） 将新分离的猪原代皮肤角质形成细胞重悬于1-2mL 猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基中，转移 至已接种F 细胞的培养瓶，培养基体积补至7mL，置于培养箱 （37℃，5%CO ）培养。 2 （6）24h 后观察，若有漂浮细胞，需更换新鲜猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基。更换时，动作轻柔， 防止F 细胞脱落飘起。 深圳市永生原代细胞生物科技有限公司 企业QQ：3169429558 深圳市南山区高新北六道兰光科技园A612 电话：07550755 销售邮箱：sales@ 猪原代皮肤角质形成细胞的换液： 建议每隔2-3 天更换新的猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基。首先吸弃旧的培养基，用4mL PBS缓冲 液轻轻润洗 1-2 次，然后加入7mL 新鲜的猪原代皮肤角质形成细胞基础培养基。 F 细胞的更换： 建议每隔2-4 天更换F 细胞。 （1） 小心吸去培养基，4mL PBS缓冲液润洗2 次，加入0.6mL 0.02%EDTA （PH7.2-7.4，细胞培养专 用，不含钙镁离子，使用前37℃水浴复温）。轻轻晃动细胞培养瓶，使EDTA 铺满整个细胞层后，轻轻 拍打细胞培养瓶使F 细胞脱落，同时谨防猪原代皮肤角质形成细胞脱落。 （2）去除脱落的F 细胞后，用4mLPBS缓冲液轻轻润洗3 次，加入5-6mL 猪原代皮肤角质形成细胞基 础培养基。 （3） 复苏新的F 细胞，加入培养瓶继续共培养。 (★若猪原代皮肤角质形成细胞克隆较多，可适当减少F 细胞的用量。) （4） 5h 或过夜后观察F 细胞的贴壁情况，若有漂浮的F 细胞，先更换新鲜猪原代皮肤角质形成细胞基 础培养基；再看整体细胞的融合度，若不足80%，需补加新的F 细胞。 猪原代皮肤角质形成细胞的消化传代： 若猪原代皮肤角质形成细胞融合度达80%，或者融合度不足80%但个别大克隆发生挤出现象或老化趋势， 则需消化传代。 （1）吸去培养基，4mL P