高中生物最新人教版 基因工程 名师精编单元测试.docVIP

……………………………………………………………名校名师推荐………………………………………………… PAGE PAGE 1 2018届 人教版 基因工程 单元测试 1．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题。 (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由__________连接。 (2)若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是________末端，其产物长度为__________________________________。 (3)若图1中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有________种不同长度的DNA片段。 (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是______________。 解析：(1)题干中强调“一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基”，可通过画出DNA结构示意图解决。(2)Sma Ⅰ识别并切割的序列为CCC↓GGG，所以产生的末端为平末端，经Sma Ⅰ切割后，DNA片段会形成三个小的DNA片段，按切割位点算分别是：534＋3＝537(bp)；796－3－3＝790(bp)；658＋3＝661(bp)。(3)用Sma Ⅰ切割基因D，会形成537 bp、790bp、661 bp三种类型。题图1中虚线方框内C—G被T—A替换，失去了一个酶切位点，则会被切割成534＋796－3＝1 327(bp)和658＋3＝661(bp)两种类型。所以一共会得到537 bp、790 bp、1 327 bp、661 bp 4种类型的片段。(4)根据基因D和质粒的核苷酸序列可知，可选用BamH Ⅰ和Mbo Ⅰ进行切割，但Mbo Ⅰ会破坏掉两种抗生素抗性基因，因此只能用BamH Ⅰ进行切割。 答案：(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 (2)平　537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamH Ⅰ　抗生素B　同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接 2．下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题： (1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于________态的大肠杆菌。 (2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中________。 (3)若BamH Ⅰ酶切的DNA末端与Bcl Ⅰ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为________，对于该部位，这两种酶________(填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。 (4)若用Sau3A Ⅰ切图1质粒最多可能获得________种大小不同的DNA片段。 解析：(1)选择的限制酶应在目的基因两端且在质粒中存在识别位点，故可以用来切割的限制酶为Bcl Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ，但由于BamH Ⅰ和Sau3A Ⅰ可能使质粒中的启动子丢失或破坏抗性基因，所以应选用Bcl Ⅰ、Hind Ⅲ两种限制酶切割。酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入感受态的大肠杆菌中，使其增殖。(2)根据质粒上抗性基因，为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素。平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物需要与单链两端相应互补序列结合，故所用引物组成是图2中的引物甲和引物丙。(3)若BamH Ⅰ酶切的DNA末端和Bcl Ⅰ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 eq \a\vs4\al(T GATC C,A CTAG G)eq \b\lc\(\rc\)(\a\vs4\al\co1(G GATC A,C CTAG T))，由于两种酶均不能识别该部位的碱基对序列，所用两种酶都不能切