实验三抑制剂子和激动剂对酶活性的影响.pptVIP

实验三 抑制剂和激动剂对酶活性的影响 一 实验目的（Experimental Objectives）： 1．掌握竞争性抑制作用的概念和特点。 2．了解影响酶活性的其它因素。 3．分析实验现象。 二、实验原理(Experimental Principles)： 影响酶活性的因素： 温度 pH值 激活剂 抑制剂 对酶活性的抑制作用分类 不可逆性抑制作用 竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用 竞争性抑制作用 抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 反应模式 竞争性抑制作用特点 1、I结构常与S结构类似 2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心 3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用 4、(表观）Km值增大，Vm值不变 无氧 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶 三、实验材料、主要仪器和试剂（Equipments , Materials and Agents） （一）主要仪器：离心机、恒温水箱。 （二）主要试剂： 1．0.2mol/L 琥珀酸 2．0.02mol/L 琥珀酸 3．0.2mol/L 丙二酸 4．0.02mol/L 丙二酸 上述四中溶液调节pH值为7.4。 5．0.02%甲烯蓝 6．1/15mol/L的Na2 HPO4 四、操作步骤（Operating Procedure） 1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入10 ml1/15mol/L的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中，2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其它试管备用。 2、取试管6支，按照下列表格操作： 加入物（滴） 1 2 3 4 5 6 0.2mol/L琥珀酸 10 10 10 - 10 10 0.02mol/L琥珀酸 - - - 10 - - 0.2mol/L 丙二酸 - 10 - 10 - - 0.02mol/L 丙二酸 - - 10 - - - 蒸馏水 10 - - - 25 10 0.02%甲烯蓝 3 3 3 3 3 3 酶的提取液 15 15 15 15 - 15 3、各管混匀后，沿试管的内壁加入15滴石蜡油（隔绝空气），放置到37℃水浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间，解释其现象。 五、结果与分析：（Results and Analysis ） 根据实验的现象，观察得到的结果，并解释其相关的实验现象。为什么滴石蜡油？ 六、思考题：(Questions) 什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医学上的应用。 七.注意事项：(Notices) 1．注意密切观察颜色变化。 2．加入各种试剂要注意看清标签，不能混用滴管 * * 可逆性抑制作用 非竞争行抑制作用 + I EI E + S E + P ES [S][I]：高浓度的底物可解除抑制 抑制剂↑ 1/V 1/[S] 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 甲烯蓝（MB） 甲烯白（MBH2）+FAD 煮后的酶提取液