华东地区部分猪场关节炎主要病原菌流行状况调查及致病基因变异分析-养殖专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文《华东地区部分猪场关节炎主 要病原菌流行状况调查及致病基因变异分析》，是本人在导师的指导 下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对 本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密?。 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 项目资助 浦东新区科技发展基金创新资金“浦东地区猪关节病主要病因调查及 综合防治措施研究”（PKJ2014-NO7）； 上海市“生猪产业技术体系建设项目” 上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 华东地区部分猪场关节炎主要病原菌流行状况调查及致 病基因变异分析 摘 要 猪关节炎（porcine arthritis）是指由一种或多种因素造成的关节 组织炎症，通常由细菌性病原引起。据研究，我国大部分猪场关节炎 主要由猪链球菌（ streptococcus suis ， S.suis ）， 副 猪 嗜 血 杆 菌 （haemophilus parasuis,HPS）和葡萄球菌（Staphylococcus）等病原菌 引起，给猪养殖业带来了极大损失。S.suis 和 HPS 还能引起猪其他的 临床症状，且由于长期应用抗生素，导致病原菌表现出多重耐药性， 给猪场疾病防治造成了很大困难。 为了解我国华东地区部分猪场猪关节炎主要病原体的流行状况， 本文根据链球菌 2 型（streptococcus suis type 2，S.suis2）的荚膜多糖 基因 cps2J 和 HPS 的 16s rRNA 基因建立了检测猪链球菌 2 型和副猪 嗜血杆菌的二重 PCR 检测方法，利用该方法，对 2013-2014 年期间 华东地区部分猪场疑似猪关节炎的 120 份细菌样品进行检测鉴定，获 得 14 株 S.suis2 和 12 株 HPS。在 120 份细菌样品中检测到 21 株 S suis， 表明 S.suis2 是链球菌中主要流行菌株，并通过进一步建立的系列多 重 PCR 方法证明 S.suis 分离株的毒力因子分布型为低毒力型： +cps2J-/+mrp-ef-sly-gdh-/+gadph-/+orf2。将 14 株 S.suis2 的荚膜多糖 基因 cps2J 与四株国内株和两株国外株进行序列比对，结果显示同源 性为 94%—99%，说明 S.suis2 分离株的 cps2J 基因发生了变异，基 因进化树分析表明华东地区 S.suis2 具有广域性；对 4 株 HPS 分离株 进行 tbpA 基因的限制性片段多态性（ restriction fragment length polymorphism，RFLP）分型分析，结果表明 4 株 HPS 都为副猪嗜血 杆菌杆菌最流行的 DBE 型。对 S.suis 和 HPS 分离株进行药敏试验， 发现两种菌表现多重耐药性，并且青霉素类类和头孢菌素类药物对两 I 者均有较好的敏感性，提示青霉素类药物和头孢菌素类药物可作为猪 关节炎的治疗药物。 本研究首先为检测猪场关节病主要病原提供了快速准确的检测 方法，检测结果为华东地区猪关节病病原学研究积累了有益资料，对 病原菌主要毒力因子的初步分析可为未来疫苗的研制提供参考，药敏 试验也可为制定猪关节病防治措施提供一定的指导。 关键词：猪关节炎、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、系列多重 PCR、毒力 因子、药敏试验 II 上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 INVESTIGATION ON EPIDEMIC STATUS OF PROCINE ARTHRITIS AND GENETIC VARIATION OF VIRULENCE GENE OF MAIN PATHOGENS IN EAST CHINA ABSTRACT Porcine arthritis is a tissue inflammation caused by one or more factors, and bacteria are main pathogens. Accord