化合物l029抑制hgf和ngf酪氨酸激酶及其抗肿瘤活性研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 2.2 L029 抑制肿瘤细胞体内成瘤 30 2.3 L029 体外抑制 c-Met 和 TrkA 激酶活性 32 2.4 L029 抑制 HGF 诱导信号途径 34 2.5 L029 抑制 Tpr-Met 转化 Ba/F3 细胞生长 35 2.6 L029 抑制 NGF 介导的信号途径 36 2.7 L029 体内抑制神经母细胞瘤 SK-N-SH 细胞生长 37 2.8 L029 不影响 EGF、VEGF 诱导的信号途径 39 3 讨论 40 4 参考文献 42 5 结论 44 附录 45 综述 45 c-Met 的结构，功能和作为分子治疗靶点的潜力 45 个人简历 56 致 谢 57 化合物 L029 抑制 HGF 和 NGF 酪氨酸激酶及其抗肿 瘤活性研究 摘 要 肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病错误!未指定书签。。近年由于环境恶化， 我国每年新增肿瘤患者 160 万-170 万人，肿瘤患者总数正迅速增长。传统抗肿瘤 药物着眼点是杀伤癌细胞，但基于细胞毒作用而发挥作用的抗癌药物难以避免选 择性差、毒副作用大等缺点。当前国际上抗肿瘤药物发展的主要方向就是以肿瘤 发生发展过程中的关键分子作为靶标，设计选择性作用于这些分子的拮抗剂。近 年来，以酪氨酸激酶类受体为靶标的药物设计获得了巨大成功，已有多种与肿瘤 密切相关的酪氨酸激酶类受体的抑制剂被应用于临床或进入临床研究，还有更多 针对不同激酶的抑制剂正在进行不同阶段的临床研究，有望推出新的靶向抗肿瘤 药物。 c-Met 激酶是肝细胞生长因子 HGF 的高亲和力受体，在组织损伤修复、伤口 愈合、肝再生及胚胎发育过程中行使重要功能。研究表明 c-Met 的异常表达可直 接导致肿瘤发生。c-Met 通过与 HGF 结合后，激活下游信号通路，破坏肿瘤细胞 间的黏附，促进细胞运动，进而增强肿瘤细胞的侵袭能力及血管生成。临床肿瘤 病人中 c-Met 的异常表达与肿瘤病人的预后差、疾病进程快、高转移及生存期短 密切相关。c-Met 已成为国际上公认的肿瘤治疗靶标。目前作用于 c-Met 的抑制剂 分为两类：一类是生物类，主要包括抗体及抑制性多肽，另外一类是合成的小分 子化合物。其中小分子化合物由于其分子量小、易吸收、给药方式简单等优点越 来越引起关注。 Trk (NTRK)激酶属于受体酪氨酸激酶家族中的一个小家族，该家族激酶是神 经营养蛋白（neurotrophin）受体，在中枢及周围神经系统的发育与维持中作用重 要。成员包括 TrkA (NTRK1), TrkB (NTRK2),and TrkC (NTRK3)。越来越多的证据 表明 Trk 与肿瘤发生发展密切相关。对 Trk 信号通路的抑制已经成为肿瘤治疗的 策略之一。针对 Trk 的小分子抑制剂及基于治疗用的单克隆抗体已经开发用于外 周疼痛的临床干预、中枢神经系统异常及肿瘤的治疗。关于 Trk 激酶抑制剂的专 利主要集中在国外几个大的药物开发公司如：Amgen、Bayer、 BMS、Novartis、 Pfizer 等，国内对 Trk 激酶抑制剂的研究尚鲜有报道。 目前国际上还未见报道能同时特异抑制 c-Met 和 Trk 激酶的化合物。前期， 本实验室通过对各类酪氨酸激酶抑制剂结构和活性的分析，设计和合成了近 2000 余种候选化合物，通过体外抑制肿瘤细胞增殖实验，我们发现化合物 L029 具有 抑制肿瘤细胞生长的活性，并初步证明 L029 可抑制 HGFc-Met 诱导的信号途径。 本课题研究我们进一步证实 L029 在体内、外可抑制多种肿瘤细胞的生长；体外 激酶抑制实验证明 L029 可选择性抑制 c-Met 和 TrkA 激酶活性，其 IC50 分别为 0.22 μM 和 29nM，但对其它多种激酶活性则无明显抑制作用。L029 在体外培养 的细胞中也可有效抑制 HGF 诱导的 c-Met 磷酸化和 NGF 诱导的 TrkA 的磷酸化以 及它们介导的 ERK、PI3K 等下游信号途径的活化，对其他细胞因子如 EGF、 VEGF 介导的信号通路无明显影响。这些结果提示 L029 可能是一种抗肿瘤先导化 合物，其机理与抑制 c-Met 和 Trk 激酶相关。 关键词：RTK L029 c-Met TrkA 抗肿瘤药物 Compound L029 Inhibits HGF and NGF Tyrosine kinase and its Antitumor Activity ABSTRACT Tumor has been a serious disease that threatens human health. In recent years,