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第10章 核酸的生物合成 ? 中心法则(central dogma) DNA RNA 蛋白质 几个基本概念： 第1节 DNA的生物合成 三个方面： 1.复制 2.损伤修复 3.逆转录 三种大肠杆菌DNA聚合酶 1. DNA聚合酶I 3′ 5′外切酶； 5′ 3′聚合酶 5′ 3′外切酶 作用：切除引物、填补空缺、损伤修复 2. DNA聚合酶Ⅱ 3′ 5′外切酶 5′ 3′聚合酶 作用：DNA损伤修复 3. DNA聚合酶III 大肠杆菌DNA复制的主要酶 （二）引物酶和引发体 所有DNA聚合酶都只能在模板链的指令下，在引物（通常RNA）3’-OH添加新核苷酸功能，没有从头合成活力； 引物酶合成一小段RNA，作为DNA合成的引物； 必须与几种辅助蛋白组装成引发体，才有合成引物的活性。 如：DonaB、DonaC、DonaT、PriA、PriB、PriC等 （三）DNA连接酶（DNA ligase) 3’,5’ 磷酸二酯键的形成 哺乳动物：ATP供能， 大肠杆菌：NAD供能， 都需要Mg2+ 在DNA复制、重组及损伤修复中起作用 催化二段DNA链之间3’,5’ 磷酸二酯键的形成 （四）解螺旋酶 催化DNA双螺旋解链； 需ATP供能。 （五）单链结合蛋白（SSB） 与解开的单链结合，防止形成双螺旋； 防止核酸酶的降解； （六）拓扑异构酶 二、DNA的复制 半保留复制方式 DNA复制合成的子代DNA分子中，一条来自亲代DNA分子，另一条是新合成的，所以称为半保留复制。 二、DNA的复制过程 (2)模板DNA解除高级结构 解螺旋酶把双螺旋解开成单链，SSB立即结合单链。拓扑异构酶解开复制叉前方的超缠现象。 （3）RNA引物的形成 由引发酶以单链DNA为模板，按5’→3’合成引物。 原核生物 双向复制 （θ型复制） 特定起始点：oriC 真核生物 多个复制单位（复制泡） （复制起始点+复制叉） 多个起始点 DNA的起点和方式 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 在RNA引物上，由DNA聚合酶Ⅲ催化，在引物3’-OH每掺入一个核苷酸，从底物dNTP切下一个焦磷酸。 体内仅存在5’ → 3’的DNA聚合酶 去除RNA引物 补充空缺 连接 DNA聚合酶Ⅰ的小片段 5’ 3’外切酶 DNA聚合酶Ⅰ的大片段 3’ 5’外切酶 5’ 3’聚合酶 DNA连接酶 严格的碱基配对规律 聚合酶的选择作用 复制时有即时的校读功能 3’ 5’外切酶功能 DNA损伤的修复 四、逆转录作用 以RNA为模板合成DNA的过程。 逆转录酶（依赖于RNA的DNA聚合酶）。 逆转录酶性质 自发因素 物理因素 化学因素 紫外线损伤 电离辐射损伤（X线/?线） 亚硝酸盐 C U 5-溴尿嘧啶 5-BU A 氮芥类 烷化剂 羟胺 C- A 2. DNA损伤修复 光修复 切除修复 重组修复 3、DNA突变 第2节 RNA的生物合成 基因转录:以DNA为模板的RNA聚合酶的催化下，按照碱基配对原则，以四种NTP为原料，合成一条与DNA互补的RNA链的过程。 不对称转录:DNA双链中一条链的某一区段作为模板合成RNA，而另一条链不用于合成RNA。 转录起始于DNA模板的一个特定位点（启动子），并在一定位点终止（终止子），这个转录区域称为转录单位。 在转录中，双股DNA中只有一条链是模板（模板链）（反意义链） （-链） 另一条链为（编码链）（有意义链） （+链） 一、催化RNA合成的酶 1. 大肠杆菌RNA聚合酶 全酶= α2ββ’ σ 核心酶= α2ββ’ 　　　σ—识别转录起始信号。 β’—参与酶与底物的结合，以及与σ因子和核心 酶的结合。 β —参与σ因子和核心酶的结合，并参与RNA合成的引发、延伸。 α —与模板的结合、酶的滑动以及碱基识别有关。 大肠杆菌RNA聚合酶的结构示意图 2. 真核细胞RNA聚合酶 　　　在DEAE-Sephadex柱上的洗脱次序称为酶Ⅰ、II、 Ⅲ