地衣芽孢杆菌脂肪酶发酵条件优化及固定化研究-生物学专业论文.docxVIP

浙江理工大学学位论文独创’I生声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行 浙江理工大学学位论文独创’I生声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行 的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致 谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果，也不包含为获得浙江理工大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做 的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 菱磊，为 签字日期： 7．o∥年雩月，岁日 万方数据 学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝江理工大学有权保留并向国 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝江理工大学有权保留并向国 家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被 查阅和借阅。本人授权浙江理工大学可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：是本易、匆 签字日期： 矽矽年 多月，歹日 导师签名： 砌磊、幺 签字日期：汐厂年罗月，多日 万方数据 、逝江理工太堂硇±堂位论文 、逝江理工太堂硇±堂位论文 地盔荭孢枉菌眙脏醛筮醛釜i生优化及固定生匕班宜 摘要 脂肪酶(EC 3．1．1．3)是可以水解长链甘油三酯的水解酶家族成员，它是生 物催化剂的工业应用领域中非常重要的一员。随着脂肪酶的作用机制和应用范围 被不断发现和扩展，微生物脂肪酶已经被广泛应用到洗涤剂、香料、能源、食品 工业、化学合成、化妆品、生物传感器、生物降解、酯类及氨基酸衍生产品等诸 多领域。 绝大多数工业应用的酶都是通过微生物大规模发酵来获取的，随着工业应用 对脂肪酶需求量的不断增大，除了通过寻找新型脂肪酶生产菌株及基因工程改造 已有菌株外，利用科学合理的试验设计方法对发酵产酶条件进行优化提高脂肪酶 产量或者利用固定化酶来提高酶的利用率也是十分重要的途径，本研究正是在这 样的背景下提出的。 在本实验室已构建地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenifarmis)胞外脂肪酶Bii02：2： 重组枯草芽孢杆菌(Bacillussub／ills)蛋白酶缺失型菌株WB700的基础上，本研 究以该地衣芽孢杆菌胞外脂肪酶表达菌株为研究对象，利用响应面设计方法 (Response Surface Methodology，RsM)对其产酶条件进行优化，利用氨基型载 体ZH—HA，对脂肪酶进行固定化并研究了固定化前后脂肪酶的基本性质。 通过RSM进行优化后得到了最佳培养基成分的配比，并利用该最佳培养基 进行了10 L发酵中试放大试验，在发酵进行到30 h时发酵上清液总酶活力达到 46 U／mL，相比优化前摇瓶培养时的17．3 U／mL提高了2．6倍。利用氨基型载体 ZH．HA进行固定化后，固定化酶颗粒最适反应表观pH在10．0左右，最适反应 温度为45℃，该固定化酶颗粒工作稳定性很高，在重复使用15个批次后，酶 活力还能保留90％以上，大大提高了酶的重复利用率。本研究结果将为脂肪酶的 工业生产提供重要理论依据。 关键词：脂肪酶： 枯草芽孢杆菌；RSM； ZH．HA； 固定化酶 万方数据 浙．江理工太生亟±堂位论文 浙．江理工太生亟±堂位论文 地衣茳孢扛菌脂膻酶蕴醛釜住优化及固定化班宜 Abstract Lipases(EC 3．1．1．3、are a class of enzymes which catalyse the hydrolysis oflong chain triglycerides．Lipases constitute the most important member of biocatalysts in industrial applications．In recent years，with the rapid development of enzyme technology，the mechanism of action and application range of lipase have been constantly found and extended，microbial lipases are currently receiving much attention．Microbial lipases have been widely applied to various industrial fields， including：detergent，spices，energy，food industry，chemical