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水稻细胞超微结构的透射电镜观察
/e1010145 DOI:10.21769/BioProtoc.1010145
水稻细胞超微结构的透射电镜观察
Ultrastructure Obeservation of Rice Cells by
Transmission Electron Microscopy
曹剑波，程珂，袁猛*
作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉
*通讯作者邮箱：myuan@
引用格式：曹剑波，程珂，袁猛. (2018). 水稻细胞超微结构的透射电镜观察. Bio-101. Doi:
10.21769/BioProtoc.1010145.
How to cite: Cao, J. B., Cheng, K. and Yuan, M. (2018). Ultrastructure obeservation of rice cells by
transmission electron microscopy. Bio- 101. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010145. (in Chinese)
实验原理：根据固定剂和包埋剂对水稻细胞结构的原位固定和保存，利用高分辨率的
透射电子显微镜对水稻细胞进行成像和观察。
实验目的：可以观察水稻细胞的超微结构、亚细胞器 (细胞核、叶绿体、线粒体、内
质网、过氧化酶体及其他质体) 的结构。
关键词：透射电镜，超微结构，水稻细胞
材料与试剂
1. 2 ml 离心管
2. 吸管
3. 注射器
4. 牙签
5. 细毛笔
6. 滤纸
7. NaH PO ·2H O
2 4 2
8. Na HPO ·12H O
2 4 2
9. 戊二醛
10. 锇酸
11. Epon812 (SPI, USA)
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1
/e1010145 DOI:10.21769/BioProtoc.1010145
12. DDSA
13. NMA
14. DMP-30
15. 醋酸铀
16. 硝酸铅Pb(NO )
3 2
17. 柠檬酸三钠 (Na C H O ·2H O)
2 6 5 7 2
18. 氢氧化钠
19. 丙酮 (国药试剂)
20. 固定剂 (见溶液配方)
21. 0.1 M pH 7.2 PBS 缓冲液 (见溶液配方)
22. 脱水剂 (见溶液配方)
23. 包埋剂 (见溶液配方)
24. 染色液 (见溶液配方)
1) 醋酸铀染液
2) 柠檬酸铅染液
仪器设备
1. 烘箱 (温度范围25-100 °C，国产)
2. 磁力搅拌器 (国产)
3. 干燥器 (国产)
4. 冰箱
5. 玻璃刀制刀机 (Leica KMR3，Germany)
6. 钻石刀 (超薄级，DiTOME，Switzerland)
7. 超薄切片机 (Leica UC6，Germany)
8. 透射电子显微镜 (H-7650，Japan)
9. 用具：手术剪刀、眼科镊子、量筒、烧杯、包埋模具、酒精灯、玻璃条、铜网、铜
网镊子
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2
/e1010145 DOI:10.21769/BioProtoc.1010145
实验步骤
3
1. 取样：将水稻组织切成1 mm 的小块，每份样品至少取20 个小块，迅速置于2.5%
戊二醛固定液中，抽真空至样品沉底后再继续抽2 h，4 °C 固定一周以内。不同水
稻组织取样要求：组织要在固定液中剪切。叶片切成1 x 1 mm 小块，花药两端剪
开，幼嫩组织取大些但不能超过3 mm3
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