双特异性组蛋白去甲基化酶cekdm7a结构与功能研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

复 复 P 大 学 博 丨：学 位 论 文 H IF hypoxia-inducible factor 缺氧诱导因子 2H G 2-hydroxyglutarate 2-经基戊二酸 H G A hydroxyglutaric aciduria 经戊二酸尿症 2 复 口. 复 口.人 学 博 丨：学 位 论 文 摘 要 组 蛋 白 甲基 化 是 表 观 遗 传 学 中 重 要 的修 饰 ，通 常 发 生 在 组 蛋 白 N -末 端 的 赖 氨 酸 （K ) 和 精 氨 酸 （R ) 残 基 上 ， 与 异 染 色 质 形 成 、基 因 印 记 、X 染 色 体 失 活 及 D N A 损 伤 修 复 都 具 有 密 切 关 系 。组 蛋 白 甲基 化 也 是 可 逆 的 ，至 今 已发 现 了两 类 赖 氨 酸 去 甲基 化 酶 ：一 种 以L S D 1为 代 表 ，是 一 类 黄 素 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 依 赖 性 胺氧 化酶 ；另一类 为含有Jm jC 结构域 的蛋 白家 族 ，主要通 过氧化 羟化机制 发生 去 甲 基 化 作 用 。 ceK D M 7A 是一个源于线虫 ，包含 了PH D 和Jm jC 结构域 的去 甲基化酶 ，能够 使 二 甲基 化 的H 3K 9 和 H 3K 2 7 去 甲基 化 ，且 在 体 内通 过 P H D 结 构 域 识 别 H 3K 4m e3 发 挥 其 去 甲基 化 酶 活 性 的 。本 文 以ceK D M 7A 为 研 究 对 象 ，通 过 对 ceK D M 7A 单 体 和5种多肽复合物 的晶体结构研 究和生化分析 ，发现 PH D 结构域通过P片层作用 与 H 3K 4m e3 紧 密 结 合 ， Jm jC 催 化 核 心 主 要 通 过 一 系 列 氢 键 作 用 识 别 H 3K 9m e2/H 3K 2 7m e2 , 且 两 种 多肽 与 ceK D M 7A 作 用 方 式 相 似 。 复 合 物 结 构 几 何 测量结果表 明，结合PH D 结构域 的H 3K 4m e3 ，结合Jm jC 结构域 的H 3K 9m e2 可能 是 来 自不 同 的 多肽 分 子 ，暗 示 蛋 白酶 可 能 是 通 过 /m m -histon e方 式 识 别 底 物 的 。 同 时 ，为 了研 究 2-H G 竞 争 抑 制 多 种 ct-酮 戊 二 酸 依 赖 的双 加 氧 酶 的 作 用 机 制 ， 我 们 同 样 以 组 蛋 白 去 甲 基 化 酶 ceK D M 7A 为 研 究 对 象 ， 通 过 对 2 -H G /a -K G 与 ceK D M 7A 复 合 物 晶 体 结 构 分 析 ，发 现 二 者 与 酶 的 作 用 位 点 相 同 ，说 明D -2-H G 是 a -K G 的 有 力 竞 争 者 ，这 为 以 后 对 2 -H G 作 用 机 制 的 更 深 入 研 究 和 肿 瘤 靶 向药 物 治 疗 的 设 计 提 供 新 的 思 路 和 结 构 基 础 。 关 键 词 ： 去 甲基 化 酶 ，ceK D M 7A ， 晶 体 结 构 ，2 -H G 中图书分类 号 ：Q 5 1 3 复 人学 复 人学博I.?学位论文 A b s tra c t H istone m ethy lation , w hich occurs on b oth arginine an d ly sine resid ues, is reco gn ized as an im po rtan t epigenetic m odification linked to h eterochrom atin form ation, genom ic im p rinting an d X -chrom osom e inactivation as w ell as D N A dam age resp on se.A lth ou gh h istone m eth ylation w as lon g con sidered irreversib le,the recent identification of num erou s site-sp ecific histone dem eth y lases prov ides com pelling evidence that th is m odification is dyn am ically regu lated . T ill now , tw o distinct classes of dem ethy lases hav e b een ch ar