商陆皂苷甲急性毒性与通利二便药效学及其作用机制研究分析中药学专业论文.docxVIP

目 目 录 摘；要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．I ABSTRACT III 缩略词表 VII 前 言 ．1 第一章EsA急性毒性研究 3 一、材料与方法 3 1实验材料 3 2实验方法 4 二、一般毒性症状研究结果 ．5 1预实验结果 5 2 LD50结果 ．5 3中毒症状 ． 5 4药物对体重的影响 6 三、靶器官鉴定 ． ．7 四、结论与讨论 7 第二章 基于水通道蛋白的EsA利尿作用机制研究 。9 一、利尿作用研究 10 1实验材料 。10 2实验方法 ．10 3结果 ．．1 1 4小结与讨论 ．12 二、免疫组化测定AQP2、AQP4蛋白表达 ．．13 l实验材料 ．．14 2实验方法 ．．14 3结果 ．16 4小结与讨论 ．1 8 三、实时荧光定量测定AQP2、AQP4mRNA表达 三、实时荧光定量测定AQP2、AQP4mRNA表达 ．20 1实验材料 。20 2实验方法 ．21 3结果 ．25 4小结与讨论 ．28 四、结论与讨论 ．．29 第三章 EsA泻下作用研究 ．31 一、实验材料 3 1 二、实验方法 ．．3 1 1复方地芬诺酯致便秘小鼠排便试验 ．31 2复方地芬诺酯致便秘小鼠小肠推进试验 32 3统计学方法 ．33 三、结果 ．33 l排便试验 33 2小肠推进试验 ．．34 四、结论与讨论 ．34 结语与创新 ．．37 文献综述 ．．39 参考文献 ．53 发表论文 6 2 致谢 ． ．6 3 摘要201 摘要 201 0版《中国药典》一部记载商陆有毒，具有逐水消肿、通利二 便等功能。商陆皂苷甲(Esculentoside A，以下简称EsA)是从商陆 中提取的一种含量最高的三萜类皂苷。本研究是国家自然基金面上项 目一一《基于峻泻逐水及毒性与商陆皂苷甲变化相关的商陆炮制科学 内涵的构建》(编号：81 1 73555)任务的一部分，主要围绕EsA的急 性毒性和通利二便作用以及从水通道蛋白角度揭示EsA利尿作用机 制展开一系列研究。 目的：初步了解EsA对小鼠急性毒性的强弱及特点，并测定相关 参数；观察EsA对水负荷大鼠的利尿作用，研究其对肾脏水通道蛋白 2(AQP2)和水通道蛋白4(AQP4)的蛋白及mRNA表达调节作用， 探讨EsA利尿作用机制；通过复方地芬诺酯致便秘小鼠小肠推进试验 及排便试验，研究EsA的泻下作用。 方法：向小鼠腹腔注射不同浓度的EsA，观察给药后小鼠毒性反 应并记录各组小鼠死亡情况；向水负荷状态大鼠腹腔注射不同浓度 EsA，每2 h收集一次尿液，连续收集6 h，分别测定各时段尿量并计 算6 h总尿量。之后将大鼠麻醉，解剖取出肾脏，运用免疫组化及实 时荧光定量PCR方法检测肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达的变 化；向复方地芬诺酯致便秘小鼠腹腔注射不同浓度EsA并灌服墨汁， 每2 h收集一次粪便，连续收集10 h，记录每只小鼠首粒黑便出现时 间，粪便阴干后称量每一时段内的排便量并计算总排便量；向复方地 芬诺酯致便秘小鼠腹腔注射不同浓度EsA并灌服墨汁，给药25min 后脱椎处死，测量并计算小肠推进率； 结果： OBliss法测得EsA的LD50为26．19 mg·kg一，95％的可信区间为 23．11 mg·kg～--,29．85 mg·kg一；随着EsA浓度的增加，小鼠的毒性反应 表现越明显，且小鼠的死亡率随之增加，空白对照组小鼠无异常反应； 由病理切片的检查可知，EsA对小鼠肝脏、肾脏造成了不同程度的损 伤。②利尿实验中，高剂量组大鼠尿量与阴性对照组比较有显著性差 伤。②利尿实验中，高剂量组大鼠尿量与阴性对照组比较有显著性差 异(PO．05)，中、低剂量与阴性对照组比较无显著性差异。高剂量组 EsA利尿作用主要发挥在给药后4 h内，而阳性对照药氢氯噻嗪主要 在给药后2 h内发挥药效，说明高剂量EsA有一定的利尿作用且作用 时间较氢氯噻嗪长。 ③运用免疫组化及实时荧光定量PCR技术检测发现，高剂量组大 鼠肾脏AQP2、AQP4的蛋白及mRNA表达均较阴性对照组下调 (P0．05)，差异具有统计学意义；中、低剂量组大鼠肾脏AQP2、AQP4 的蛋白及mRNA表达与阴性对照组相比无显著性差异。 ④在排便试验中，与模型组比较，EsA高、中剂量组小鼠首粒黑 便出现时间缩短且总排便量增加，差异具有统计学意义(P0．05)。小 肠推进试验中EsA高、中、低剂量组小鼠小肠推进率与模型组比较均 无显著性差异。 结论：EsA有一定的毒性，但对于该成分是否是商陆中的唯一或 主要毒性成分，尚需深入研究；EsA在给