蜡梅转录因子基因anl2的克隆和功能探究林学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 蜡梅转录因子基因ANL2 蜡梅转录因子基因ANL2的克隆和功能探究 目录 摘 要 ．i Abstract ．． ． ．． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ．．．． ． ． ． ． ．． ．． ． ． ．．．ii l前言 l 1．1植物转录因子的研究进展 ．．1 1．1．1植物转录因子的发现和概念 l 1．1．2植物转录因子的结构 2 1．1-3植物转录因子的分类 3 1．2植物转录因子HD—ZIP的研究概况 4 1．2．1植物转录因子HD．ZIP的来源 4 1．2．2植物转录因子HD-ZIP的结构和分类 5 1．3植物转录因子ANL2的研究概况 9 1．4研究目的、内容及意义 10 1．5技术路线 11 2蜡梅转录因子基因ANL2的克隆和序列分析 12 2．1 前言 一12 2．2材料和方法 12 2．2．1实验材料 ．12 2．2．2实验方法 ．13 2．2．2．1蜡梅花瓣RNA的提取和检测 ．13 2．2．2．2蜡梅花eDNA第一链的合成和检测 ．．14 2．2．2．3 CpANL2的克隆 15 2．3结果与分析 17 2．3．1蜡梅花朵RNA质量的检测 _ 17 2．3．2 CpANL2全长克隆 18 2．3．3 CpANL2的生物信息学分析 19 2．3．3．1 CpANL2的碱基序列分析 一19 2．3．3．2 CpANL2基因的氨基酸序列和蛋白质性质分析 19 3蜡梅CpANL2基因表达量分析 ．23 3．1前言 23 3．2材料和方法 ．23 3．2．1材料、仪器和试剂 ～23 3．2．2实验方法 23 3．2．2．1蜡梅砌、『A的提取 ．．23 3．2．2．2蜡梅RNA反转录成eDNA第一链 24 3．2．2．3 CpANL2基因RT-PCR 。24 3．3结果与分析 。25 万方数据 华中农业大学2015 华中农业大学2015届硕士学位论文 3．3．1蜡梅花RNA质量检测 25 3．3．2实时定量PCR实验结果 25 4蜡梅CpANL2基因植物双元表达载体的构建和农杆菌转化 26 4．1材料和方法 ．26 4．1．1实验材料 ．26 4．1．2试剂和仪器 。26 4．1．3实验方法 一27 4．1．3．1目的片段加酶切位点引物 27 4．1．3．2 CpANL2-pEASY-T1重组质粒和pCAMBIA2300质粒的提取 27 4．1．3．3 CpANL2-pCAMBl,42300的构建 ．．28 4．1．3．4 CpANL2-pCAMBbt2300重组质粒转化农杆菌 一29 4．1．3．5 CpANL2-pCAMBIA2300重组质粒转化农杆菌菌落检测 ．．30 4．2结果与分析 ．30 4．2．1 CpANL2-pCAMBIA2300表达载体的构建 ．．30 4．2．2 CpANL2-pCAMBbt2300重组质粒转化农杆菌 ．3l 5 CpANL2的遗传转化研究 ．．32 5．1材料和方法 ．32 5．1．1实验材料 _ 32 5．1．2试剂和仪器 32 5．1．3实验方法 一33 5．1．3．1农杆菌介导法转化拟南芥 一33 5．1．3．2农杆菌介导法转化烟草 一34 5．2．1农杆菌介导法转化拟南芥 ．35 5．2．1．1农杆菌介导法转化野生型拟南芥 ．．35 5．2．1．2农杆菌介导法转化突变体拟南芥 37 5．2．2农杆菌介导法转化烟草 一39 6结论与讨论 ．．41 6．1蜡梅CpANL2的克隆 41 6．2蜡梅CpANL2基因的序列和蛋白质生物信息学分析 4l 6．3蜡梅CpANL2表达量分析 42 6．4蜡梅CpANL2基因植物双元表达载体的构建和农杆菌转化 43 6．5蜡梅CpANL2基因功能探究 43 7总结与展望 ．44 参考文献 45 致谢 ．．：；：! II 万方数据 蜡梅转录因子基因ANL2 蜡梅转录因子基因ANL2的克隆和功能探究 捅要 蜡梅(Chimonanthuspraecox L．)，是蜡梅科蜡梅属的一种观赏性极强的树种， 素以于寒冬腊月傲雪盛放而名，花朵颜色淡雅，花香扑鼻，沁人心脾。在蜡梅的研 究中，蜡梅品种分为素心蜡梅品种群、晕心蜡梅品种群和红心蜡梅品种群，其中素 心蜡梅花朵通体黄色，清新淡雅，而红心蜡梅内被片呈紫红色，中被片和外被片呈 淡黄色，总体色彩层次有致，观赏性极高。在拟南芥中，ANL2转录因子调控拟南 芥叶片和茎中花青素的分布，蜡质的合成以及根部细胞发育。 本文对蜡梅ANL2转录因子进行探究，克隆到ANL2的全长片段，构建植株双 元表达载体pCAMBIA2300-CpANL2，农杆菌介导法浸染拟南芥野生型、拟南芥突变 体和烟草，得到转基因植株，对转基因植株的表型进行研究和分析。主要研究结果 如下： 1．筛选转录组库中