微生物培养基79264.docVIP

实验二十 高氏1号培养基的制备 一、 目的要求 通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。 二、 基本原理 高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由 可溶性淀粉（作为碳源）,KNOb（作为氮源）,NaCKOPO, -3H20.MgS0. -7H20 （作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSOi ? 7H20 （作为微生物的微量元素，提供铁离了）等组成。由于磷酸盐和镁盐和混 合吋产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，-?般是按配方的顺序依次溶 解各成分。对于象FeSO. ? 7氏0这样的微量成分，则可预先配成高浓度的 贮备液，在配制培养基时按需要加入一定的量。 高氏1号培养基配方如下： 可溶性淀粉20g NaCl 0. 5g KNOa lg K2HPO4 ? 3H20 0. 5g MgSO.? 7H,0 0? 5g FeSO. ? 7比0 0. Olg 琼脂15—20g 水 1000ml pH 7. 4—7. 6 三、 器材 可溶性淀粉,KNO3, NaCl, OPO, ? 3H,0, MgSO； ? 7H,0, FeSO, ? 7H：O 琼脂，lmol/L NaOH, lmol/ LHC1 ； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛 角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5?5—9?0）,棉花，牛皮纸，记 号笔，麻绳，纱布等。 四、 操作步骤 称量和溶化 按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成 糊状，再加入少丁所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。 再称取其他各成分依次逐一溶化。对微量成分FeSOi ? 7氏0可先配成高浓 度的贮备液后再加入，方法是先在100ml水中加入lg的FeSO. ? 7氏0配成 0. 01g/ml,再在1000ml培养基中加入1ml的0. 01g/ml的贮备液即可。 待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制同体培养基, 其溶化过程同实验十九。 pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同实验十九。 五、实验报告 思考题 （1） 什么叫天然培养基？什么叫合成培养基？ （2） 配制合成培养基加入微量元素吋最好用什么方法加入？天然培 养基为什么不需要另加微量元素？ 实验五微生物培养基的配制和灭菌 培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养 基质。培养基为微工物的工长提供营养物质和生存空间。它具冇微牛物正常牛:活所盂的各种 养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）介 适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基 的配制是微牛物学工作者的主要技术操作 培养基的种类： 根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类： 介成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 半合成培养基：由一部分纯化学物质和刘一部分天然物质配制而成。 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培养基的物理状态来分： 液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。 固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产詁 培养基。 半固体培养基：在液体培养基中加入0.2%-0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物 质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。 是一种多糖类化合物，主耍成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种对逆性胶体，在常规 浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42°C以下，又凝固为固 体。 一、 目的要求 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 熟悉分离、培养微生物前的冇关准备工作及操作方法。 二、 实验材料 药品：牛肉膏、蛋口腺、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4. KN03、MgSO4-7H2O FeSO4?7H2O 筹。 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。 其它：天平、牛角匙、电炉、1NHC1、INNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量简、 漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、 吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。 三、 实验程序 （一）、培养基配制 培养基配制的一般方法和步骤 （1） 称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 （2） 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根据实验需要加入蒸饰水或白來水），用玻棒 搅匀，加热溶解。 （3） 调pH值（调pH也町以在加琼脂后再调），用IN N