微生物生理学课程微生物碱性蛋白酶的性质研究进展.docVIP

微生物碱性蛋白酶的性质研究进展 摘要：综述了微生物碱性蛋白酶的研究状况，包括酶的微生物来 源、酶学特性、微生物碱性蛋白酶在国内外的应用研究和现状， 并对其前景进行了展望。 关键词:碱性蛋白酶 蛋白酶酶学性质 微生物生理 1碱性蛋白酶概述 蛋口酶(protease),水解蛋口质肽键的一类酶的总称。蛋口酶是一种重要 的工业化应用的酶制剂，占酶制剂市场的65%以上⑴，广泛用于洗涤剂、制革、银 回收、医药、食品加工、饲料、化学工业、废物处理等行业。蛋白酶执行大量的 不同的生理功能，从细胞水平扩展到器官和冇机体水平，导致比如止血和发炎等 的级联系统。它们负责包括在正常牛理功能和在非正常状态下的病理牛理功能的 复杂过程。它们也存在于致病生物体的生活史中，这就使它们成为一个潜在的发 展治疗因子的对象，来治愈如癌症和艾滋病等可怕疾病。此外，蛋白酶应用于食 品和清洁剂工业具有悠久的历史。在皮革工业中用于脱毛和皮革软化，来替代以 往有毒化学药剂的使用还是一个相对较新的领域，这同时也增加了它的生物化学 方面的重要性⑵。蛋白IW的多样性以及它们特定的功能已经引起了世界范围内对 开发它们的生理学和生物工程的的广泛关注。微生物具有生t速度快、生长条件 较简单、代谢过程特殊和分布广等特点，微生物来源的蛋白酶，由于具冇培养简 便，产量丰富等特点，适于工业化生产而得以广泛应用。近三十年來，人们对微 生物蛋片酶的研究越來越深入，高产工程菌的选育以及对蛋白酶的纯化、结构和 性质研究又为大规模工业化生产及应用提供了坚实的基础⑶。随着生物化学分了 生物学、基因工程、蛋口质工程的兴起，蛋口酶的研究和应用进入了一个崭新的 阶段。而碱性蛋白酶也因其稳定的生物活性和相对特姝的作用条件而成为目前市 场上应用最为广泛的蛋白酶之一。 2蛋白酶的分类 蛋门酶是一类复杂的水解酶，它们在生理、生化和催化特性方面有很大的差 异。目前，对蛋白酶进行分类主耍依据三个标准:①裂解反应的类型；②裂解位 点的化学特征;③与结构和关的进化关系。根据国际生物化学和分了生物学命名 委员会的建议，微生物蛋白酶根据作用于蛋白酶底物的位点总体上分为内肽酶和 外肽酶；外肽酶切开蛋口质或多肽分子氨基或竣基末端的肽键而游离出氨基酸。 其中作用于氨基末端的称为氨肽酶，作用于竣基末端的称为竣肽酶。内肽酶切开 蛋白质分子内部肽键，生成分子量较小的多肽类。根据它们的活性中心和必需基 团分乂可以分为四类：1丝氨酸蛋白酶、2天冬氨酸蛋白酶、3半胱氨酸蛋白酶、 4金属蛋白酶，这是目前比较流行的分类方法；根据其最适作用pH还可以分为 酸性蛋口酶，小性蛋口酶和碱性蛋口酶。 2. 1丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶广泛存在于各种生物体中，这类酶的活性部位又称活性丝氨酸 残基，可被二界丙基氟磷酸(DFP)或者苯甲基磺酰氟(PMSF)抑制，很多丝 氨酸蛋白酶也可被PCMB所抑制。该类酶水解时通常分为两步反应，在反应屮 被切断的氨基酸或肽链片段与酶Z间会以共价相连，这一?臥基化步骤Z后跟随一 个去瞅基化过程，这一去瞅基化过程是一个水的亲核反应，结果是肽链的水解。 丝氨酸内肽酶可分为三类:类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶、类弹性蛋白酶，它们 分别作用于带止电氨基酸残基、疏水残基、小疏水残基，多数丝氨酸蛋白酶的催 化基团是Ser-His-Asp的三联休。丝氨酸蛋白酶它们对底物的特异性较小，具低 的分子量(18. 5^35KDa)。多数丝氨酸蛋白酶的等电点为4. 4~6?2之间。此类酶 几乎全是内肽酶，胰蛋口酶、糜蛋门酶、弹性蛋口酶等都属此类。其中最知名的 碱性丝氨酸蛋白酶是市Bacillus 1 icheni formis产生的枯草杆菌蛋白酶。真菌 的碱性丝氨酸蛋白酶被认为参与体内激素原的加工过程。 2.2天冬氨酸蛋白酶 天冬氨酸蛋口酶的特性是在低pH (3?4)条件下具有最大活性，活性屮心含 有天冬氨酸残基，广泛存在于真菌中，很少在细菌中存在。这类酶对其他三类酶 的抑制剂不敏感。大多数天冬氨酸蛋白酶的分子量在30?45KDa之间，等电点通 常在3.4?4.6 Z间。它们要求切点两旁的氨基酸为芳香族氨基酸残基。多数真菌 的天冬氨酸蛋白酶在屮性pH条件下不稳定。其催化活性依赖于天冬氨酸残基, 晶体学研究表明，天冬氨酸蛋口酶的胃蛋白酶家系都貝?有两叶的分了结合剂如 EDTA,该酶的活性位点位于两叶之间，每一叶都为天冬氨酸蛋白酶提供了维持 其活性所必须的一对天冬氨酸残基屮的一个，这两叶彼此相互同源，通过基因复 制得到。胃蛋口酶家系中大部分酶活性位点的天冬氨酸残基都在一个 1 OAsp-Thr-Gly-Xaa的基序屮，该基序同时位于两叶的氨基端和竣端，莫屮Xaa 可以是Ser或Thr,其侧链可通过氢键与Asp相连。 2.3半胱氨酸蛋白酶 只有少数真菌可产生半胱氨酸蛋