微生物工程教案07.docVIP

授课题目 灭菌技术 授课类型 理论 首次授课时间 2011年 10月19日 学时 2 教学目标 了解灭菌的方式方法，区别几种灭菌方式的相同点和不同点； 了解实验室培养基灭菌及工业灭菌的特点及操作方法； 了解空气灭菌的基木方法，掌握典型的空气除菌流程。 重点与难点 微生物的热死规律 教学手段与方法 教学模式：启发讲解与学生讨论相结合。 教学手段：板书。 教学过程：（包括授课思路、过程设计、讲解要点及各部分具体内容、时间分配等） 授课过程： 第五章灭菌技术sterilization 为什么要灭菌？（杂菌污染的后果） 营养基质或产物被消耗损失； 抑制生产菌的生长； 抑制产物的生物合成； 杂菌繁殖导致培养液性质（如pH）改变，造成牛物反应异常。 第一节灭菌原理与方法 灭菌（sterilization）是指利用物理或化学方法，杀灭或去除物料或设备屮所有微生物的技术或 工艺过程。灭菌方法有化学物质灭菌、辐射灭菌、过滤介质除菌和热灭菌等。 一、 化学物质灭菌 通过改变微生物细胞膜的渗透性，或者损伤细胞膜，影响微生物细胞的正常代谢。 不适合于培养基的灭菌，只适合于局部空间或某些器械的消毒。 （一） 无机酸、碱及盐类 酸碱的杀菌能力主要山其电离度而定，电离出得氢离子或氢氧根离子浓度越高，杀菌力越强。 盐溶液的杀菌力与其浓度成正比。（腌咸菜可以保藏很长时间而不染菌） （二） 重金属盐 杀菌原理是重金属盐使细胞中蛋白质失活。比如升汞。服食牛奶、鸡蛋等高蛋白含量食物可解 O （三） 氧化剂 高镒酸钾 （四） 有机化合物 乙醇：脱水、使蛋白质变性和沉淀，70?75%最冇效。 二、 辐射灭菌 紫外线：诱导胸腺II密噪二聚体的形成，从而抑制了 DNA的复制；空气在紫外线照射下产生臭 氧，臭氧也具有一定的杀菌作用。 X射线、丫射线：能量极高，被菌体吸收后，菌体内的水和有机物产生强烈的离了化反应，形 成0H?、过氧化氢和有机过氧化物，这些过氧化物阻碍微生物的代谢活动而导致菌体迅速死亡。 三、 过滤介质除菌 工业上利川过滤的方法制备大量的无菌空气，供好氧微生物的深层培养使川。 四、 干热灭菌 火焰灼烧法 干热空气灭菌法：140?160°C维持2~3h。 五、 湿热灭菌 湿热灭菌条件为121°C维持20?30min。 巴氏杀菌（Pasteurization）低温消毒法，主要应用于生产酸奶乳制品。目前国际上通用的巴氏 高温消毒法主要冇两种： 一种是将牛奶加热到62?65°C,保持30分钟。采用这一方法，可杀死牛奶屮各种生长型致病 菌，灭菌效率可达97.3%?99.9%,经消毒后残留的只是部分嗜热菌及耐热性菌以及芽砲等，但这些 细菌多数是乳酸菌，乳酸菌不但对人无害反而有益健康。 第二种方法将牛奶加热到75?90°C,保温15?16秒，其杀菌时间更短，工作效率更高。但杀菌 的基本原则是，能将病原菌杀死即可，温度太高反而会冇较多的营养损失。 二、微生物的热死规律 対微牛物进行湿热火菌时，死广速率可视为一级反应，即微生物的死广速率与残存的微生物数 量成正比，这就是对数残留定律，具数学表达式为： -dN/dt=kN 积分得 lnN/N（）=?kt 或 N=N（）exp（?kt） 式中n——存在的活菌数，个； No——当t=0时，培养基中的活菌数，个； t 灭菌吋间，s； k—速率常数或死广比速率常数，S-o死广比速率k的绝对值反映了微生物耐热性的 强弱，k越人，表明微生物越易死亡。 在某一恒定温度下，以细胞数N对时间作图，可得到图5?1。P69 从图中可以看出，如果要达到彻底灭菌，即N=0,所需的灭菌时间t为无限长，这在生产上 是不可行的。为了达到一定的无菌水平孔（，显然需要一定的灭菌吋间ts“通常Nst值约为104个 细胞/ml。 培养基营养成分受热破坏也可看做一级反应，即 de _ 式屮c 对热不稳定物质的浓度，mol/L； kd——分解速率常数，sX 温度升高时，微牛物死亡速率的增加，比营养成分的分解速率的增加人得多。因此，在较高温 度下可以通过缩短灭菌时间而减少营养成分的损失，这是高温瞬时灭菌法（HTST）的理论基础。 第二节培养基灭菌 一、实验室培养基灭菌 高压蒸汽灭菌法 121 °C 灭菌 15 ?30min 液体除菌器 対于热不稳定、体积小的液体培养基，不适合用高压蒸汽灭菌，可采用过滤除菌的方法。此法 的最人优点是不破坏培养基中的化学成分。 种类很多，有瓷质、玻璃制、石棉制以及火胶棉等。比如滤膜过滤器。 二、大生产培养基灭菌 工业牛产屮培养基的灭菌方法有分批灭菌和连续灭菌2种。 （一） 分批灭菌 乂称实罐灭菌或实消，是将配制好的培养基放在发酵罐或其他容器中，通入蒸汽加热，达到灭 菌温度和压力后维持一段时间，再冷却至发酵要求的温度。 投资少，设备简单，灭菌效果可靠