富集骨髓干细胞复合磷酸三钙移植促进骨修复外科学骨科专业论文.docxVIP

海交通人学博I饽±位论文 海交通人学博I饽±位论文 中文摘要 材料分别植入12只裸鼠右股后肌袋内，于4、8周分别进行大体观察、材料中部扫 描电镜观察、x线观察、骨密度测定和组织学观察。应用图像软件对X线片中材料组 织块的相对密度进行测量，观察降解和成骨情况。 4 富集骨髓MSCs复合多iL B—TCP促进羊脊柱后路融合的实验研究 建立羊后路脊柱融合动物模型，将12只羊的6个腰椎，共36节段，按植入材料 随机分为A组(自体富集骨髓MSCs／13一TCP)、B组(单纯13一TCP)和C组(自体髂 骨)。于术后12、24周分批取样，分别进行大体检查判断融合情况、x线观察材料降 解情况、cT横断扫描进行融合评分、无间隔扫描计算新生骨体积、骨密度测量融合 区的矿化密度、生物力学检测融合节段的最大载荷、刚度以及组织学观察新骨形成 率和B—TCP材料的降解率。 5．富集骨髓MSCs复合多孔13一TCP促进骨修复的l临床研究 应用富集骨髓MSCs复合多孔13-TCP共治疗I临床患者47例(脊柱融合40例、骨 不连6例、骨囊肿l例)，通过COBE 299UM血细胞分选系统，快速富集骨髓MSCs， 在术中复合多孔B—TCP后，进行回植治疗。通过体外诱导培养，测定碱性磷酸酶(ALP) 染色阳性的细胞集落(CFU)数量变化及来评价富集MSCs效率，观察年龄、性别和 原发病种对骨髓MSCs的影响，分析骨髓NCs和MSCs富集倍数的相关性。并通过细 菌学检测，临床随访，x线、CT检查评价安全性和治疗效果。 结果： 1．富集前后骨髓MSCs均增殖良好。富集后骨髓NCs和MSCs数量明显增加， PO．01。生长曲线显示：富集前后MSCs增殖活力无显著变化，PO．05。富集后增殖 期MSCs相对比例减少，PO．05。富集前后MSCs正常、凋亡、机械损伤和坏死细胞 的比例均无显著变化，PO．05。富集后CD45一、CD34一／CD45的细胞相对比例有所减 少，PO．05。富集前后原代贴壁细胞中CD34一、CD45一、CD34一／CD45一、CDl05+、CD90+ 和CD44+的细胞相对比例无显著的差异，PO．05。富集后原代骨髓MSCs的ALP、Von Kossa染色显示成骨活性增强。 2扫描电镜观察快速复合2h已有部分MSCs贴壁，24h后贴壁细胞最多，48h已 有胶原基质分泌；经体外培养，复合后多孔B—TCP内部有较多MSCs生长。复合24h 海交通人学博I‘学位论文 海交通人学博I‘学位论文 中艾摘盟 组的富集MSCs对D一葡萄糖的消耗最多。倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察，富集 MSCs可在多孔13-TCP材料表面和深部孔隙中良好生长。复合B—TCP的MSCs对J)-葡 萄糖和L一乳酸代谢显著高于单纯平面培养的MSCs，P(O．05。DNA相对定量显示复合 B—TCP组比单纯平面培养组，MSCs的数量更多，P(O．05。 3．实验组(富集骨髓MSCs／B—TCP)和对照组(单纯0一TCP)裸鼠伤口均良好愈 合。扫描电镜观察，在多孔B—TCP的中心，实验组有大量的组织细胞生长，而对照 组基本无细胞生长。x线观察，8周时材料密度下降，实验组材料组织块的相对密度 值比对照组下降更明显。与实验组DEXA值下降明显(PO．05)相一致。脱钙组织学 观察：8周时，实验组有3／6例发现异位成骨，对照组无成骨现象。 4．富集后羊骨髓MSCs显著增加，PO．01。大体触摸判断羊脊柱融合，A组(富 集骨髓MSCs／B～TCP)92％(11／12)，B组(单纯B—TCP)j8％(7／12)，c组(自体 骨)75％(9／12)，PO．05。CI’扫描测定脊柱融合率A、B、C三组分别为92％(1l／12)、 58％(7／12)，100％(12／12)，PO．05。X线观察，4周起A、B组融合区密度下降 明显，第12周后，A组密度有所回升。c组自第4周起融合区密度逐渐上升。CT扫 描12周时A、c两组椎板外侧有大量的新骨形成，B组新骨形成少。cT对新生骨组 织体积重建，A组B组，PO．05。 DEXA检测结果与x线观察一致，4周时A、B组植骨区的BMD值c组BMD值，P(O．05。 12周时A组c组，PO．05．24周时，三组间无统计学差异。4周起，A、B组BMD值 随时川有先下降再回升的趋势，而c组BMD值随时间显著上升。生物力学检测融合 节段的最大耐受载荷．】2周时A、C组B组，PO．05，24周时，三组问均值大小为， AC组B组，但PO．05。融合节段刚度，12周时三组均值顺序为，c组A组B组， PO．05。24周时，三组刚度均有显著上升，PO．05，且c组B组，PO．05。 脱钙组织学观察，12周时A、c组融合区有大量新生板层骨组织，B组新生骨组 织少，24周时，A、