弓形虫gra10复合表位壳聚糖微球疫苗的实验研究病原生物学专业论文.docxVIP

CONTENTSAbstract(Chinese) CONTENTS Abstract(Chinese) 1 Abstract(English) ．．3 Symbolic Description 5 Int】‘oduction ．6 ChaDter I ．10 Materials ．．10 Methods 1 1 Results ．．1 5 Discussion 23 Conclusion ．．25 ChaDter II 26 】Ⅵaterials ．．26 Methods 27 Results ．．29 Discussion 35 Conclusion ．．37 ChapterIII 38 Materials ．．38 Methods 38 Results ．．39 Discussion 45 Conclusion ．．47 Conclusion and 0utlook ．48 Ref-erences ．49 Supplement 56 Acknowledgements ．．65 Achievements ．．66 万方数据 山东大学硕士学位论文弓形虫GRAlo复合表位壳聚糖微球疫苗的实验研究 山东大学硕士学位论文 弓形虫GRAlo复合表位壳聚糖微球疫苗的实验研究 专业： 病原生物学 研究生： 尹绘权 导 师： 丛华副教授 摘要 弓形虫疫苗的研究经历了从虫体灭活疫苗、减毒活疫苗和基因工程疫苗 的巨大飞跃。虫体灭活疫苗安全性较高，但保护性较弱，基本没有实用价值； 减毒活疫苗具有较好的免疫力，但其存在很大的安全隐患：基因工程疫苗可 安全有效刺激机体产生特异性的免疫应答，但受限于载体容量无法提供全面 的有效保护。目前表位疫苗被认为是第四代疫苗，是新近发展起来的的疫苗 研制趋势。表位疫苗设计灵活、特异性强，直接进行人工合成的表位疫苗能够 被具有遗传多样性的MHC分子所识别进而提高抗原递呈效率，诱导宿主产生高 效的体液免疫和细胞反应。 本课题评估了弓形虫GRAl O蛋白的优势表位作为弓形虫表位疫苗的潜 力。GRAlO(致密颗粒蛋白10)是一种由364个氨基酸序列构成的新型致密 颗粒蛋白，参与并调节宿主细胞rRNA的合成，对虫体在胞内的生长与增殖扮 演着重要的角色。我们通过生物信息学和免疫学方法预测筛选出了弓形虫 GRAl0蛋白中的B细胞表位、CD4+T细胞表位和CD8+T细胞表位，组成弓 形虫GRAl0复合表位并对其免疫原性进行检测。壳聚糖由于其生物相容性好、 生物可降解易于合成和修饰加工等优势成为了疫苗载体和佐剂研究中的热 点。因此我们将复合表位用壳聚糖微球进行装载，构建弓形虫GRAlO复合表位 万方数据 山东大学硕士学位论文壳聚糖微球疫苗。 山东大学硕士学位论文 壳聚糖微球疫苗。 通过体外诱导树突状细胞，观察微球疫苗刺激树突状细胞抗原提成能力的改 变，从而对该疫苗的免疫机制进行初步探讨。通过免疫接种小鼠，检测小鼠免疫 后体液免疫和细胞免疫各项指标的水平，评估该疫苗对弓形虫慢性感染的保护 性。结果显示，弓形虫GRAl0复合表位具有更好的免疫原性，可发挥B细胞表 位、CD4+T细胞表位和CD8+T细胞表位的联合作用。进一步机制研究发现， 弓形虫GRAl 0复合表位壳聚糖微球疫苗可以有效诱导树突状细胞高表达表面协 同刺激分子CD86和分泌更多的细胞因子，进而有效刺激淋巴细胞参与免疫应 答。在小鼠免疫接种实验表明，弓形虫GRAlO复合表位壳聚糖微球疫苗不仅可 以诱导小鼠产生高水平的抗体IgG及IgG2a，而且可以有效的提高脾细胞的增殖 水平，诱导产生促进CD8+T细胞亚群增殖为主并产生大量Thl型细胞因子 IL．2，IFN．Y的细胞免疫反应，说明疫苗能够诱导小鼠产生很强的体液免疫和细 胞免疫水平。而且弓形虫GRAl0复合表位壳聚糖微球疫苗可以有效降低小鼠脑 内包囊的生成，对抵抗弓形虫慢性感染有明显的作用。 本研究证实弓形虫GRAl0复合表位壳聚糖微球疫苗可以有效保护小鼠抵抗 弓形虫慢性感染，是一种有潜力的候选疫苗，为弓形虫疫苗研制奠定了基础。 关键词：弓形虫；GRAl0：表位疫苗；壳聚糖；微球 万方数据 山东大学硕士学位论文Experimental 山东大学硕士学位论文 Experimental study on the Vaccine of Z咖Z缸纷l口≤汐以脚 encoding GRAl0 epitopes combined with chitosan microsphere M匈or： PacllogeIlic Biology Graduate student： Yin Huiquan SuperVisor： Cong Hua(Associate Professor) ABSTRACT Z grD聆疣f Vaccine haV