革兰氏阳性中度嗜盐菌响应渗透胁迫的差异蛋白质组学研究微生物学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 达坂喜盐芽孢杆菌(Halobacillus dabanens括)D一81是一株分离自新疆达坂湖的革兰氏阳性 中度嗜盐菌，能在0．5％~23％盐浓度的SW培养基上生长，最适生长盐浓度是3％～15％。为揭示 革兰氏阳性中度嗜盐菌的耐盐机制，利用差异蛋白质组学研究技术，得到了高分辨率的双向电泳 图谱。在电泳胶上清晰地分离出大约700个蛋白点，分子量为17．5,-,,66kDa，等电点范围为3．5~5．9， 表明D-81菌株中的蛋白质大多数属于酸性蛋白质。此外，大量的高丰度蛋白质集中在4．5,-,5．0的 极窄范嗣的等电点区域，人多数的低丰度蛋白质分布在图谱的其他部分。 利用蛋白质组学技术研究了D．81菌株受到剧烈的高盐冲击时的差异表达蛋白谱，鉴定了一 些与高盐冲击相关的蛋白质。采用双向电泳分离技术和ImageMasterTM 2D Platinum图像软件分 析方法，对在1％盐浓度下生|殳的D．81菌株(培养18h)和受到25％盐浓度的瞬间冲击5 min和 50 min后的蛋白质表达谱进行比较研究的结果表明，高盐冲击斤总计有74个蛋白点表达量显著 改变，其中24个蛋白点在高盐下表达量明显增加，8个高盐诱导的新蛋白点，以及42个表达量 显著下降的蛋白点。利用MALDI-TOF，MS检测肽质指纹谱和MASCOT检索蛋白质数据库，初 步鉴定了7个高盐冲击后表达量增加的蛋白质，它们涉及信号传导途径(类CheY接受器)、能量 代谢途径(草酰乙酸脱羧酶、烯醇酶)、热激蛋白和分子伴侣(I类热激蛋白，有伴侣活性的ATP 酶以及ClpC ATP酶)和抗逆蛋白(烯醇酶)等。此外，CIpC ATP酶是首次鉴定存在于革兰氏阳 性中度嗜盐菌中。 为了探讨D．81菌株受到低渗冲击时的差异表达蛋白，对生长在20％盐度下的D一81菌株(培 养18h)受到剧烈的低渗冲击(O％盐度)5min和50rain屙的蛋白质表达谱进行了比较分析。结 果显示，总计有39个蛋白点的表达量发生了明显改变，其中21个蛋白点的表达量明显增加(包 括低渗冲击诱导出现的6个新蛋白点)，18个蛋白点表达量受到抑制。经过质谱分析和数据库搜 索，初步鉴定了5个低渗冲击后表达量增加的蛋白质，分别为形态检测蛋白、青霉素结合蛋白、 DnaK、CIpCATP酶和EPSPS等。此外，热激蛋白是首次鉴定在细菌受到低渗冲击时表达量增加 的蛋白质。 研究了D．81菌株在不同盐浓度F的蛋白质表达谱，发现133个蛋白点的表达量发生了明显 改变。88个蛋白点在10％和20％的高盐度卜-表达量显著增加，包括26个高盐诱导出现的新蛋白 点；45个蛋白点在高盐度下的表达量明显下降，其中包括20个表达消失的蛋白点(有16个蛋白 点只是在l％盐度中生长的细胞中才表达)。从质谱分析和蛋白质数据库匹配结果米看，D．81菌 株在高盐浓度下生K时，表达量明显增加的蛋白质主要有以下儿类：与能量代谢相关的蛋白质、 参与细胞生存和增殖的蛋白质、作为全局胁迫调节子适应多种胁迫条件的蛋白质、与亲和性溶质 如海藻糖和甜菜碱可能相关的蛋白质等。 比较了D一81菌株受到长期高盐胁迫和高盐冲击时表达量明显增加的蛋白质异同，发现该菌 与生K在1％盐浓度的条件相比，无论是长期高盐胁迫还是高盐冲击，有7个蛋白质胁迫后表达 与生K在1％盐浓度的条件相比，无论是长期高盐胁迫还是高盐冲击，有7个蛋白质胁迫后表达 量显著增加，它们分别是热激蛋白、嗜盐蛋白以及参与能量代谢和信号传导途径的蛋白质。 虽然D．87菌株属于喜盐芽孢杆菌属，然而在高盐度(10％和20％盐／g)下即使是生长至稳 定期，D一87卣侏细胞也很少有芽孢形成。 关键词：达坂喜盐芽孢杆菌，般向电泳，质谱(MALDI．TOF／MS)鉴定，差异显示蛋白质组学 高盐冲击，低渗冲击，氏期高盐胁迫 Il AbstractHalobaeillus Abstract Halobaeillus dabanensis D一8，a Gram—positive moderately halophilic bacterium，was isolated from the saline deposits of Daban Iake in the Xinjiang Uygnr Autonomous Region of China．It grow in the complex medium containing O．5％to 23％salt with the optimum growth salinity ranging from 3％to 15％．To investigate the salt tolerant mechanisms ofthe Gram-positive moderately halophilic ba