多发性肌炎皮肌炎外周血单个核细胞microrna表达谱分析临床医学专业论文.docxVIP

学校代码： 学校代码： 10023 学 号： 200701043 多发性肌炎／皮肌炎外周血单个核细胞 mi croRNA表达谱分析 专业年级： 北京协和医学院临床医学专业2007级 姓 名： 何林蓉 导 师： 曾小峰(教授) 指导老师： 王迁(副教授)吴婵媛(副教授) 北京协和医学院临床学院(北京协和医院) 风湿免疫科 完成日期： 2015年6月 万方数据 目录中文摘要 目录 中文摘要 1 ABSTRACT 。3 前言 5 基础实验(一) 7 多发性肌炎／皮肌炎外周血单个核细胞MIRNA表达谱 7 研究目的 7 研究材料 7 研究方法 8 研究结果 12 讨论 ． 19 基础实验(二) 。21 REAL-TIME PCR验证PM／DM患者PBMC中MIRNA及其靶基因的差异表达 21 研究目的 ．．21 研究材料 21 研究方法 ．．22 研究结果 25 讨论 ． 30 结论 ． ． ．．32 临床部分(一) ．33 多发性肌炎，皮肌炎血清抗体与临床的相关性分析 33 资料及方法 ．．33 结果 ． 35 讨论 ．． ．． ． ．．． ． ．． ．． 40 结论 ． ．． ． ． ． ．42 临床部分(二) ．43 多发性肌炎／皮肌炎患者住院死亡的相关危险因素分析 43 资料与方法 ．．43 结果 ．．45 讨论 ． ． ．． ．． ．．．．．． ．． ．．47 结论 ． ． ． ． ． 。49 参考文献 49 综i苤 ．54 多发性肌炎／皮肌炎病因及发病机制综述 ．54 附录 ．64 2 万方数据 中文摘要目的： 中文摘要 目的： (1)筛选并验证与多发性肌炎(polymyosi Lj S，PM)和皮肌炎(dermatOmyositiS， DM)相关的外周血microRNA(miRNA)标志物。(2)分析PM／DM患者血清中肌炎相关 抗体(myositi S associated antibodies，MAAs)和肌炎特异性抗体(myositis specifiC antibodies，MSAs)的阳性率以及与临床的相关性。(3)探索PM／DM患 者住院死亡相关危险因素。 方法： (1)通过miRNA表达谱芯片筛选未经治疗的PM／DM患者外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cellS，PBMC)中差异性表达的miRNA。通过文 献检索及生物信息学分析，对差异表达的miRNA进行进行靶基因预测及信号通路分 析，挑选出与PM／DM发病相关的miRNA进行扩大样本的real—time PCR验证，并分 析其表达水平与临床特征及实验室指标的相关性。应用real—time PCR方法探索差 异表达miRNA的靶基因在PBMC中的表达水平。(2)回顾性收集北京协和医院诊治的 PM／DM患者228例，收集患者住院及门诊病案记录的临床资料及血清MAAs、 MSAs 检测结果。分析每种MAAs和MSAs的阳性率，并将患者根据每种抗体分为抗体阳性 组和阴性组，比较两组间临床资料的差异，分析抗体和临床的相关性。(3)回顾性 分析北京协和医院住院死亡的45例PM／DM患者，以90例存活患者作为对照，收集 两组患者的住院病历资料，进行二元logistic回归筛选和住院死亡相关的危险因 素。 结果： (1)对6例未经治疗的PM／DM患者及3例健康对照(health controlS，HC)的 PBMC进行miRNA芯片检测，筛选出38条异性表达的miRNA，其中24条表达上调， 14条表达下调。结合miRNA差异表达倍数、表达丰度，通过文献检索和生物信息学 分析，j；18选出hsa—miR一320a、hsa—miR一335—3p、hsa—miR一34a一5p、hsa—miR一454—3p 进行进一步验证。通过34例PM／DM患者及20例Hc的real—time PCR证实 hsa-miR一34a-Sp在PM／DM组PBMC中较HC组表达显著上调，相对表达量(relative quantity，RQ)为3．20(1．87，9．24)VS．1．68±0．91，P-O．001。hsa—miR一320a、 hsa—miR一335—3p、hsa—miR一454—3p在两组间表达水平无显著差异。亚组分析巾， hsa—miR一34a一5p的表达水平在DM组、肺问质病变(interstitial lung disease，ILD) 万方数据 组和DM—ILD组表达较PM组、无肺间质病变(non-ILD)组、DM—nonILD组显著上调，RQ 组和DM—ILD组表达较PM组、无肺间质病变(non-ILD)组、DM—nonILD组显著上调，RQ 值分别为4．81(2．39．1