钙及钙受体在缓解铝胁迫对拟南芥抗氧化系统影响中的作用研究植物学专业论文.docxVIP

摘要铝毒已成为酸性土壤中限制植物生长的主要因素之一，因此研究铝胁迫影响 摘要 铝毒已成为酸性土壤中限制植物生长的主要因素之一，因此研究铝胁迫影响 植物正常生长的机理具有重要的科学意义。钙在植物生长和发育以及植物抗逆过 程中具有重要作用，作为第二信使，胞内自由钙离子在植物很多生理和生化过称 中扮演重要角色。已有研究显示，外源钙的施加能缓解植物在铝胁迫下的伤害， 但是钙受体(Ca2+一sensing receptor，CAS)在外源钙缓解环境胁迫中发挥何种作 用及变化规律却仍然不清楚。本文以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)野 生型(C01．0)和CAS反义植株(CASas)为材料，结合生理指标测定、实时荧光 定量PCR技术等实验手段，探讨钙及CAS在缓解铝胁迫对拟南芥抗氧化系统影响 中的作用。主要取得以下结果： (1)分别用0至800 gM AICl3(pH 4．0)处理拟南芥C01．0和CASas幼苗，观 察了根的伸长情况并测定了叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素以及类胡萝卜素的含量。 结果发现随着铝浓度的升高，其对拟南芥根的伸长以及叶绿素含量的抑制具有剂 量效应，与C01．0相比，CASas的根伸长和叶绿素含量的抑制作用更为明显，且400 州A1C13是拟南芥忍受铝毒害的一个临界点。 (2)分别在0．2 mM CaCl2(低钙)、2 mM CaCi2(中钙)和10 mM CaCl2(高 钙)下用400 oM AICl3处理拟南芥C01．0和CASas幼苗。观察了二者的表型伤害， 并比较了胁迫后二者的叶绿素含量、可溶性蛋白含量、活性氧(ROS)累积量、 丙二醛(MDA)含量、铝累积量以及几种大量元素的含量。结果发现铝胁迫降 低了拟南芥C01．0和CASas叶绿素和可溶性蛋白的含量、增加了ROS和MDA含量。 CASas在低钙下铝胁迫长势更弱，且要[tC01．0累积更多的铝、ROS以及MDA。 增加钙浓度后，可溶性蛋白和叶绿素总量都显著增加，ROS和MDA含量也有所 降低。 (3)在低、中、高钙条件下铝处理拟南芥C01．0和CASas幼苗，测定了抗氧 化小分子如抗坏血酸(AsA)和谷胱甘肽(GSH)的含量，以及六种抗氧化酶包 括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)、 过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性。 发现铝处理下除CASas中AsA；I,，二种材料中的AsP,和GSH含量随着钙浓度的增 发现铝处理下除CASas中AsA；I,，二种材料中的AsP,和GSH含量随着钙浓度的增 加都有不同程度的增加。除CAT外，C01．0和CASas中其他5种抗氧化酶的活性受 铝的影响都有不同程度的上升，且C01．0中的GST、GR、POD及APX的活性都随 着钙浓度的增加而上升，而CASas中除PODJI，其他酶并未随着钙浓度的增加而 上升，且各个酶的活性都要低于同条件下的C01．0。 (4)在低、中、高钙条件下铝处理拟南芥C01．0和CASas幼苗，通过实时定 量PCR对编码SOD的CSDl、编码POD的AtPCa和彳沪C6以及编码APX的彳以，和 叫删行分析后发现，铝不同程度的诱导这些基因的表达上调，但是Col一0和 CASas中的表达情况存在很大差异。如C01．0中的傩DJ在铝处理下的上调幅度要 低于CASas，而纠尸积U高于CASas。且各个基因的表达都受到了钙的影响，如无 铝处理下加钙促进了CSDl和AtPCa以黝麟，的表达上调，在铝处理下也促进了 tAP)(以及C01．0中的AteCb的表达上调，同时也抑制了C01．0中的CSDl和爿以f以及 CASas中AtPCa的表达。 总之，外源钙能增加拟南芥的抗氧化响应，从而较好地缓解铝胁迫对拟南芥 幼苗所造成的伤害。从C01．0和CASas在不同钙浓度条件下铝胁迫表现出的不同抗 氧化响应可以推测钙及CAS可能参与了拟南芥抗氧化系统对铝胁迫响应的机制。 关键词：拟南芥；铝毒；钙；钙受体；抗氧化系统 Ⅱ AbstractAluminum(A1)toxicity Abstract Aluminum(A1)toxicity is one of the major factors that limit plant growth in acid soil．Calcium(Ca)is an important factor in plant growth and development硒well as plant stress resistance．As a second messenger,free cytosolic Ca ion plays an important role in many