低分子肝素分子量测定用对照品的研制微生物与生化药学专业论文.docxVIP

lIII lIII I I II III I I I 11[Jill Iff Y1 9351 43 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名：：逮乏盈盘叠堂 日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名翻多必师签名阻日期： 00／／手笔 。茹只番硕I：学位论文录 。茹只番硕I：学位论文 录 摘要 ．i ABSTRACT． ． ． ． ． ． ． ． ．． ． ． ． ．．． ． ．．iv 第一章前言 ．1 l肝素钠简介 ．1 2低分子肝素 1 2．I国外药典对LMWH的收录 l 2．2我国LMWH的概况 2 2．3生产LMWH常见的几种化学降解方法 2 2．4 LMWH分子量测定的重要性 ．6 3 LMWH分子量的测定方法 ．7 3．1高效分子排阻色谱法 ．7 3．2聚丙烯酰胺凝胶电泳法 。9 3．3多角度激光光散射仪法 1 1 3．4质谱法 ．1 3 3．5核磁共振法 14 4 LMWH几种宽分布分子量对照品的概况 15 4．1 EP LMWH分子量对照品 ．．1 5 4．2 WHO LMWH分子量对照品 16 4．3亚硝酸异戊酯降解制备的LMWH分子量对照品 ．17 4．4化学p消除法制各LMWH分子量对照品 ．18 5 LMWH窄分布对照品的概况及肝素钠分离纯化的方法 18 5．1 LMWH窄分布对照品概况 18 5．2肝素分离纯化方法 19 6本课题拟解决的问题 22 第二章制备分子量在700011100范围窄分布LMWH分子量对照品用原料．23 l材料 ．23 2方法 ．24 2．1分级醇沉法制备原料 ．24 。茹只孥硕l：学位论文2．2超滤法制备原料 。茹只孥硕l：学位论文 2．2超滤法制备原料 ．24 2．3化学p消除降解法制备原料 ．24 3结果 ．26 3．1分级醇沉制备原料的结果 26 3．2超滤法制备原料的结果 27 3．3化学p消除降解制备原料的结果 27 4讨论 ．30 5结论 ．32 第三章制备窄分布LMWH分子量测定用对照品 33 1分子量在1000—6000范围内窄分布LMWH分子量对照品的制备 ．．33 1．1材料 33 1．2方法 33 1．3结果 ．34 1．4讨论和结论 ．38 2分子量在7000．11100范围内窄分布LMWH分子量对照品的制备 ．．38 2．1材料 ．39 2．2方法 ．．； 一39 2．3结果 ．42 2．4讨论和结论 49 3用USP-HPSEC和MALLS．HPSEC标定自制窄分布LMWH分子量对照品50 3．1 USP-HPSEC对自制窄分布分子量对照品的标定 一50 3．2 HPSEC．MALLS测定各自制对照品的分子量 ．54 3．3讨论和结论 。55 4小结 ．56 第四章宽分布LMWH分子量对照品的制备 ．57 1材料 ．．57 2方法 ．57 2．1肝素酶I降解制备宽分布LMWH分子量对照品的方法 ．．57 2．2 HPSEC检测条件 ．58 2．3宽分布标样表的制备及测定LMWH分子量的方法 2．3宽分布标样表的制备及测定LMWH分子量的方法 ．58 3结果 ．．58 3．1自制宽分布分子量对照品的HPSEC结果 ．．58 3．2自制宽分布对照品的宽分布标样表的制备结果 ．59 4讨论和结论 61 第五章两种自制对照品与法定对照品测定LMWH分子量的对比研究 63 l材料 ．63 2利用自制的窄分布分子量对照品测定LMWH分子量及与USP对照品测定结 果的对比研究 ．63 2．1方法 63 2．2结果 63 2．3讨论和结论 64 3利用自制的宽分布分子量对照品测定LMWH分子量及与WHO对照品测定 结果的对比研究 一65 3．1方法 ．65 3．2结果 65 3．3讨论和结论 65 4两种法定LWMH对照品测定LMWH分子量的对比研究 ．66 4．1方法 ．66 4．2结果 66 4．3讨论和结论 67 5．小结 。68 总结 ．．70 参考文献 。73 致{射 ．．79 硕士学习期间发表的论文 ．80 。茹只呈硕Ij学