toll样受体在诱导小鼠小肠移植免疫耐受中的作用的实验研究外科学专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名： 查麦 日期：—韭q月上日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名：-盎l导师签名趁日期：划年j月土日 博t学位论文 博t学位论文 中文摘要 Toll样受体在诱导小鼠小肠移植免疫耐受中的作用的 实验研究 摘要 第一部分小鼠异位小肠移植模型的建立 目的：建立稳定的小鼠异位小肠移植模型。 方法：采用小肠供体的门静脉(Portal vein，PV)与受体下腔静脉 (Inferior vena cava，IVC)端侧吻合，供体带主动脉片的肠系膜上动 脉(Superior mesenteric artery,SMA)与受体腹主动脉端侧吻合，供 体近端肠管结扎，远端与受体空肠端侧吻合的方式建立异位小肠移植 模型。选用C57BL／6小鼠做供体和BALB／c小鼠作受体进行同种异基 因型异位节段性小肠移植(Small bowel transplantation，SBT)。术后禁 食3天，不禁饮，每天分两次经皮下分别给予5％葡萄糖生理盐水2ml， 术后不使用抗生素和免疫抑制剂。小鼠存活超过5天认为手术成功。 结果：建模初期共完成50例，仅有9例完成了手术全过程，其 余41例均在手术过程中死亡，死亡原因为动脉吻合口血栓形成20例， 大出血致出血性休克8例，门静脉吻合口血栓形成5例，吻合后血管 狭窄3例，麻醉意外3例，术后腹腔内感染1只，原因不明1例。建 模成熟稳定期共完成60例定型手术，供体手术时间37。18±5．40min， 热缺血时间约0．5min，供体肠段肠系膜上动脉组织片修整时间为3．58 ±O．52min，供体冷保存时间为29．764-3．22min，受体手术时间80．28 +学位论文 +学位论文 中文摘要 2．25min，其中腹主动脉及下腔静脉阻断时间为38．15±2．71min，静 吻合时间11．03±0．67min，动脉吻合时间16．32±1．60min，成活小 受体手术平均出血量约0．2ml。术后24h存活率为80％(48／60)， 后5天生存率为70％(42／60)。手术失败的18只小鼠主要死亡原 为动脉吻合口血栓形成8例，动脉吻合口部位狭窄4例，吻合口出 导致出血性休克4只，术后腹腔内感染1只，原因不明1例。 结论： 1、采用改良方法建立的小鼠异位小肠移植模型稳定可靠，可为 继实验研究提供基础； 2、小鼠小肠移植手术难度大，良好的供体肠段的获取、高质量 血管吻合及供、受体补液是提高小鼠小肠移植手术成功率的关键。 关键词： 小肠移植，小鼠，动物模型 第二部分小鼠小肠移植排斥反应的观察 目的：探讨各种免疫细胞及细胞因子在小鼠小肠移植排斥反应中 作用及可能机制，寻找反映排斥反应的指标。 方法：供体为C57BL／6小鼠或BALB／c小鼠，受体为BALB／c小 鼠，均为雄性，将实验动物随机分为4组，n=6：A组为BALB／c BALB／c组，术后(Post operation day,POD)I 1天处死；B组为C57BL／6 一BALB／c组，POD3处死；C组为C57BL／6呻BALB／c组，POD7处 死；D组为C57BL／6一BALB／c组，PODl l处死。采用前述方式建立 II 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 小鼠异位小肠移植模型，于术后相应天数获取标本。称取受体脾脏重 量并分离脾脏细胞，ELISA法检测血清IL．10、IFN吖和IL．17浓度水 平，HE(Hematoxylin．Eosin)染色观察移植小肠病理变化，流式细 胞技术检测受体小鼠脾脏及移植小肠内浸润细胞中各种细胞亚型。 结果：移植小肠组织病理学检测发现，A组无排斥反应发生，B 组为轻度