病毒基因组连接蛋白影响烟草脉带花叶病毒致病性的机制.pdfVIP

2．2．3注射叶片及系统侵染叶片的RNA检测……………………………………．．20 2．2．4利用ELISA测定病毒浓度…………………………………………………．．21 2．2．5实时荧光PCR：测定病毒RNA积累水平……………………………………22 2．2．6突变体侵染烟草后细胞间移动情况分析……………………………………23 2．2．7蛋白互作的YTHS和BiFC分析……………………………………………．23 3结果与分析……………………………………………………………………………………………．．29 3．1突变位点的筛选…………………………………………………………………29 3．1．1突变位点的选择及突变引物的设计…………………………………………29 3．1．2突变质粒的获得与序列测定…………………………………………………31 3．2VPg突变体在本氏烟上的致病性………………．．．…．．．…………………………32 3．2．1突变体在本氏烟上的症状……………………………………………………．32 3．2．2突变体浸润本氏烟后的RT-PCR检测………………………………………．38 3．2．3突变体对病毒浓度的影响………………．．=：…………………………………．．39 3．2．4突变体对病毒RNA积累水平的影响………………………………………．．40 3．2．5突变对病毒在本氏烟细胞间移动能力的影响。……………………………．．4l 3．3TVBMV VPg及其突变体自身互作……………………………………………．43 3．3．1 YTHS分析结果…………………………………………………………．．：…．．43 3．3．2 BiFC分析结果……………………………．．：…………………………………45 3．4VPg及其突变体与elF4E的互作………………………………………………46 3．4．1 elF4E和elF(iso)4E基因的克隆……………………………………………：…．46 3．4．2 3．4．3 3．4．4 3．5VPg突变对TVB∥IV在普通烟上致病性的影响………………………………53 3．5．1TVBⅢ及突变体在普通烟上的症状………………………………………．．53 3．5．2 TVBMV及VPg突变体在普通烟中的病毒浓度分析………………………58 4结论与讨论……………………．．．………………………．．．…………………………………………．．S9 4．1关于突变位点的筛选……………………………………………………………．．59 4．2不同位点的突变对病毒致病性的影响……．．．…………………………………60 4．2．1 VPg第10、40和54位的突变对病毒致病性的影响…………………………60 4．2．2 VPg第42和45位的突变对病毒致病性的影响……………………………．61 4．2．3 VPg第64位的突变对病毒致病性的影响……………………………………6l 4．2．4 VPg第183位的突变对病毒致病性的影响…………………………………．62 4．2．5TVBMV VPg与elF(iso)4E的互作…………………………………………．．63 参考文献………………………………………………．．．……………………………………………………．65 致谢……………………．．．……．．…．．．．……．………………………………．…………．…．．…．。。．．…。…．．．．81 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒的基因组连接蛋白(viral protein， genorne．1inked VPg)是一个多功能蛋白，通过与多个寄主因子及病毒蛋白互作参与病毒的复制，细胞 问移动及长距离移动等过程。VPg共价结合于病毒基因组RNA的5’端，位于线状病毒 粒子的末端。 vein mosaic 烟草脉带花叶病毒(Tobacco banding 毒属，近