大豆皂甙bb和纳米脂质体槲皮素对人食管癌细胞的凋亡影响营养与食品卫生学专业论文.docxVIP

郑 郑 州 大 学 2 0 09 届 硕 士 学 位 论 文 大 豆 皂 贰 B b 和 纳 米 脂 质 体 懈 皮 素 对 人 食 管 癌 细 胞 的 凋 亡 影 响 存 或 凋 亡 等 。本 实 验 以水 溶 性 的大 豆 皂 贰 B b 和 纳 米 脂 质 体 榭 皮 素 诱 导 食 管 癌 细 胞 后 ， 探 讨 大 豆 皂 贰 B b 和 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 是 否 可 作 为 组 蛋 白去 乙酞 化 酶 (H D A C) 的 抑 制 药 物 对 食 管 癌 细 胞 呈 逆 转 化 和 凋 亡 效 应 及 其 机 制 。 目的 探 讨 大 豆 皂 贰 B b 和 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 诱 导 人 食 管 癌 细 胞 逆 转 化 和 凋 亡 的 效 应 及 其 机 理 。 方 法 1. 药 物 制 备 : 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 制 备 : 以 一 定 比例 的 类 脂 和 榭 皮 素 溶 于 氯 仿 和 D M S O 后 ，采 用 真 空 旋 转 蒸 发 法 ，超 声 破 碎 仪 破 碎 ，最 后 通 过 sonm 的 滤 膜 过 滤 ，即 n L Q ; 本豆皂贰Bb( So yasaponin Bb，SSB b)，提取物购自上海同田生物公司。 2 . M T T 实 验 检 测 细 胞 生 长 抑 制 率 : 检 测 不 同浓 度 大 豆 皂 贰 B b 对 E C a一9 7 06 细 胞 的 生 长 的 影 响 ， 实 验 分 为 四 组 ，对 照 (C) 组 和 大 豆 皂 贰 B b (s s B b)组 浓 度 分 别 为 2 6 .5 拌m o l几 ， 10 6 林m o 比 ，4 2 4 卜m o l几 ，对 照 (e )组 不 72h 后 检 测 各 组 o D 值 ，并 检 测 各 组 的 细 胞 生 长 抑 制 率 ;检 测 大 豆 皂 贰 B b 和 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 对 E C a一9 7 0 6 细 胞 的 生 长 抑 制 率 ，实 验 分 为 三 组 : (l)大 豆 皂 贰 B b 组 (S s B b 组 ):用 106 林m ol/L 的 s s B b 处 理 E C a一9 706 细 胞 4 8h ; (2)纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 组 (nL Q 组 ): 用 40 林m ol/L 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 处 理 E e a一9 70 6 细 胞 4 sh ; (3)对 照 (e )组 : 不 加 药 物 培 养 4 8h 。 3 . 细 胞 凋 亡 检 测 : 实 验 分 为 三 组 ，对 照 (C) 组 ，大 豆 皂 贰 B b( s s B b) 组 浓 度 为 106 林m ol/L ， 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 组 浓 度 为 40 “m ol/L ，对 照 (C) 组 为 不 加 药 物 培 养 。用 4 % 多 聚 甲醛 固 定 三 组 细 胞 标 本 ，然 后 用 5 g/l n l 蛋 白酶 K 37 ℃ 消 化 sm in ; 再 用 4 % 多 聚 甲 醛 后 固 定 sm in ，之 后 各 标 本 加 T dT 孵 育 液 15林l，4 ℃ 过 夜 。先 用 p H 7 .5 的 Tri s一e l 一:10 0 稀 释 碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 链 霉 亲 和 素 (SA 一A P) ，37 ℃ 孵 育 2 0m in，再 用 N B T 旧 cI P 显 色 ， 3 7 ℃ 孵 育 30m in，镜 下 观 察 ，水 洗 终 止 反 应 。 同 时 进 行 以 P B S 代 替 T dT 孵 育 液 的 阴 性 对 照 。 4 . 免 疫 组 织 化 学 染 色 : 用 106 “m o F L s s B b 和 40 林m ol/L 纳 米 脂 质 体 棚 皮 素 处 理 E C a一9 7 0 6 细 胞 48 h 后 ，用 4 % 多 聚 甲醛 固 定 的 细 胞 滴 片 ，应 用 S P 试 剂 盒 ，检 测 c一m et， V E G F ， H D A C I ，p T E N ， casP ase 3 ，N F 一kB 及 C yc lin D I 的 表 达 及 定 位 。 同 时 设 以 P B S 代 替 一 抗 的 空 白对 照 。 加 药 物 培 养 。 分 别 培 养 24 h ，4 8h ， 5 . 免 疫 印 迹 : 用 10 6 “m o l/L 的 s s B b 和 4 0 林m o l/L n L Q 处 理 E C a一9 7 0 6 细 胞 4 sh 后 ， 以 Tr Tri zol 试 剂 提 取