stat3抑制高通量低能量激光照射诱导细胞凋亡的机制研究生物物理学专业论文.docxVIP

ⅢY ⅢY ¨¨i●■_ Ⅲ8 川5㈣5 mⅢ1 川2 Ⅲ2 Mechanism of the inhibitive effect of Stat3 on cell apoptosis induced by high fluence low-power laser irradiation Xuegang Sun Supervisor Professor Da Xing At MOE Key laboratory of Laser Life Science Institute of Laser Life Science，College of Biophotonics， South China Normal University November， 2010 中文摘要Star3抑制高通量低能量激光照射诱导细胞凋亡的 中文摘要 Star3抑制高通量低能量激光照射诱导细胞凋亡的 机制研究 专业名称： 生物物理学 学位申请人： 孙雪刚 导师姓名： 邢达 摘 要 低功率激光照射(10w-power laser irradiation，LPLI)可以引发多种细胞的增 殖或分化，而相对高剂量的激光照射可以引起细胞凋亡。高通量低能量激光照射 (High fluence low-power laser irradiation，HF．LPLI)是一种新发现的刺激因子， 它能够活化细胞的内源线粒体凋亡途径而导致细胞凋亡。但HF．LPLI诱导细胞 凋亡的分子机制尚未研究清楚。Stat3(Signal transducer and activator of transcription3)蛋白作为细胞的一种重要的转录因子，在促进细胞增殖和抵抗细 胞凋亡中起着非常重要的作用。本文的目的在于研究离体细胞在HF—LPLI刺激下 细胞内的分子信号事件，主要考察了HF-LPLI处理后在非洲绿猴肾细胞(African green monkey SV40．transformed kidney fibroblast cells，COS．7)中转录因子Stat3 的活性变化，Stat3的激活对细胞凋亡的影响，Stat3激活的上游激酶以及Star3 激活与激光照射产生的活性氧自由基(Reactive oxygen species，ROS)的关系， 从而探讨HF．LPLI诱导细胞凋亡可能存在的分子机制。 我们首先检测了HF．LPLI刺激后Stat3蛋白活性的变化。利用荧光标记质粒 Stat3一YFP和Stat3酪氨酸705位磷酸化抗体，分别采用细胞内实时检钡tJ(real-time single—cell analysis)技术和Western Blotting技术，我们检测了HF-LPLI处理后 Stat3．Ⅵ1P(yellow fluorescent protein)的核转位和Star3酪氨酸705位磷酸化水 平的上升。结果显示Stat3在HF．LPLI处理条件下发生核转位，且酪氨酸705位 的磷酸化水平以时间和激光剂量依赖的方式增加。二者均说明HF—LPLI刺激条 中文摘要件下Stat3被激活。 中文摘要 件下Stat3被激活。 在证实了Stat3被激活后，我们试图发现Stat3的激活对HF．LPLI诱导的细 胞凋亡的影响。由于Stat3是一种重要的促增殖和抗凋亡转录因子，因而我们推 测Stat3的激活对HF．LPLI诱导的细胞凋亡起抑制作用。我们利用了Stat3的显 性负效应(dominant negative，DN)质粒DN Stat3(Y705F)和Stat3的组成性活化 质粒(constitutively active formofStat3，stm3C)，采用细胞内实时检测技术和流 式细胞术(Flow Cytometry，FCM)，证明了DN．Stat3(Y705F)可以缩短HF-LPLI 诱导的CFP．Bax(cyan fluorescent protein)的聚集时间并提高细胞的凋亡率，而 Stm3C则可以降低细胞的凋亡率，从而证明了Stat3的激活对HF．LPLI诱导的凋 亡起抑制作用。 由于Src在多种生长因子和细胞因子刺激下可以激活Stat3，我们试图证明 Src在HF．LPLI刺激条件下是Stat3的上游激酶。我们利用了Src的抑制剂PPl 和显性负效应质粒DN．Src分别对细胞进行处理后，检测Stat3酪氨酸705位的 磷酸化水平。结果表明，在HF．LPLI刺激后，PPl可以很大程度地抑制Stat3的 核转位和酪氨酸705位磷酸化水平的提高，与此同时，DN—Sre也可以抑制705 位磷酸化水平的提高，从而证明了Src是Stat3激活的主要上游激酶。 我们以前的实验证明了HF．LPLI刺激下ROS大量产