细胞和分子生物学实验复习.docVIP

其实都是实验报告上面的。。。。就是整理了下。。。拿去用吧?? Experimentl细胞有丝分裂 间期：有明显的细胞核，染色质分布较均均，由于染色质易少碱性染料结合，故细胞核的染 色比细胞质深。核中可见1?3个染色较浅的呈球状的核仁 前期：细胞核膨人，染色质逐渐螺旋化为丝状的染色丝，其后染色丝进一步缩短变粗，形成 一定形态和帖冃的染色体（这时候的每条染色体由两条染色单体组成，但在光镜下一般不易 看清），核膜、核仁逐渐消失 小期：每条染色休屮的成对染色单休逐渐分开（但着丝粒仍未分离）全部染色体（2n=16） 移向细胞中央的赤道而上，形成赤道板。在赤道板到两而有许多纺锤丝连接细胞两极和染色 体的着丝点，成为纺锤体，但不易观察到，此时染色体形态最典型 后期：著丝粒纵裂为二。这是，每条染色体的两条染色单体已完全分开，由于纺锤丝的牵引， 分别向细胞的两极移动，形成了数口相等的两组染色体（这是所观察到的染色体数目比原來 增加1倍，是由于S期内DNA含量倍增的结果） 末期：染色体移到两极并解旋为染色质，细胞中部出现细胞板，并逐渐向边缘发展。当染色 质构成核网时，核膜、核仁重新出现。细胞板达到两边，分裂结朿，形成两个子细胞，细胞 又进入间期状态。 Experiment?动物染色体的制备 原理：染色体只有在分裂期的细胞，特别是屮期细胞屮表现出典型形态便于观察和计数，所 以必须采取特殊的技术方法，从发生冇丝分裂的组织和细胞悬液中得到。鼓常用的途径是从 骨髄细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备。骨髄细胞数量多、分裂旺盛，不需体外培 养和无菌操作，便于収材。 秋水仙素的作用：抑制纺锤体的形成，使细胞停留在分裂中期 KCI低渗溶液：使细胞膨胀，促使屮期染色体散开 固定液：有固定作用，对染色体还有一定的分散作用 Giemsa染色液：染色 结果：低倍镜下，可见到许多大笑不等被染成紫红色呈圆形的间期细胞核以及分散在它们之 间的中期分裂象。小鼠染色体一般呈“U”形,染色体2n=40 Experiments蟾蛛血细胞的体外融合 原理：细胞融合乂称体细胞杂交，通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核 细胞的过程。是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成界核体细胞，随后界核体同 步进入有丝分裂，核膜崩溃，來自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的 杂种细胞，此杂交细胞具有很强的牛?命力，增殖旺盛。细胞融合技术是研究细胞遗传、基因 定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段，也是制备单克隆细胞株的重要技术。 肝素：血液抗凝 PEG溶液：促进细胞凝集 Hanks溶液：终止PEG作用，平衡缓冲溶液使PEG的浓度降低至诱导融介的要求。 詹纳斯绿：染液 Experiment4 AKP Km 测定 原理:在温度pH和酚浓度一定时,酶促反应初速度与底物浓度的关系满足米?曼氏方程式（公 式自己补充） Km是酶的特征常数，反映了酶与特定底物的亲和力大笑。测定Km值通常用双倒数法，推 导上述米■曼氏方程式可得一直线方程：（公式自己补充），在横坐标上的截距即可算出Km tfLo AKP最适pH为10,而酶蛋白最稳定pH为测定具Km值时反应体系选择具最适pH。 木实验取pH为10 o Experiments葡萄糖定量方法一标准管法测定葡萄糖含量 原理：在葡萄糖氧化酶的催化作用下葡萄糖样化成过氧化氢和葡萄糖酸，在过氧化酶 的存在下，过氧化氢与苯酚、4?氨基安替比林与偶联酚缩合成可被分光光度计测定的红色酿 类化合物。其红色在510nm波长处有最大吸收峰，颜色的深浅在一?定范围内与血葡萄糖浓 度成正比。 结果：人体止常血糖：3.9?5.8 mmol/L Experiment6蛋「I质定量测定方法一标准曲线法测定蛋门质含量 原理：双缩腺是由两分了尿索缩介而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络 合物，此反应即为双缩服反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩腺反应。蛋白 质含有多个肽键，在碱性溶液中能与铜离子络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓 度成正比，可以用比色法进行鉴定。 Experiment?腮联免疫吸附试验（ELISA）—双抗体夹心法 原理：酶联免疫吸附试验是一种固和酶免疫测定的方法，目前广泛应用于各种抗原和抗体的 检测。其某木原理是将抗原或抗体固定在固相载体表面，并保持其免疫活性，再与酶标记抗 体或抗原联结，并保留陋的活性，然后加入晦反应的底物，后者被酶催化变为有色产物，反 应颜色的深浅可与相应抗原或抗体的量相关。在木实验中（1）川一直抗体包被固相载体; （2）加入受检的标本（含待测抗原），使抗原与固相上的抗体结合；（3）加入以辣根过氧化 物酶标记的己知抗体，使之与抗原结合。标记的酶可催化底物（四甲基联苯胺）起显色反应， 从而指示特异性抗原抗体