靶向stathmin和mdrl基因逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的研究肿瘤学专业论文.docxVIP

徐州医学院硕士学位论文缩略词表 徐州医学院硕士学位论文 缩略词表 Abbreviation K● 缩略词 英文全称 中文全称 ， 心 alkaline phosphatase 碱性磷酸酶 bp Base pairs 碱基对 cDNA 互补DNA DEPC Diethylpyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 ddH20 double distilled water 双蒸水 DMSo dimethyl sulphoxide 二甲亚枫 m们m deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核糖核酸 EDTA EGFP GAPDH IC50 IR Kan 争 LB { mRNA NC Neo OD PBS PCR 苯甲基磺酰氟化物 苯甲基磺酰氟化物 聚合酶Ⅲ 实时荧光定量PCR 耐药指数 RNA诱导的沉默复合物 每分钟转速 十二烷基硫酸钠 徐州医学院硕士学位论文靶向stathmin和mdrl基因逆转 徐州医学院硕士学位论文 靶向stathmin和mdrl基因逆转 卵巢癌细胞紫杉醇耐药的研究 中文摘要 目的探讨以RNA干扰(RNA interference，IⅢ加)技术靶向stathmin(STMNl) 和mdrl基因逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的可行性。 方法 1．构建分别靶向stathmin和mdrl基因的小发卡(small hairpin RNA，shRNA) 结构的重组质粒：pGU6-GFP—nco-STMNl和pGU6-GFP-neo．MDRl，并进行酶切 和测序鉴定。 2．用脂质体Lipofectamine 2000将质粒转染到人卵巢上皮癌紫杉醇耐药细胞 株SKOV3／TAX，实时荧光定量PCR(Real．time PCR)检测stathminm和mdrl基 因的mRNA变化，Western-blot检测其蛋白表达变化。 3．将质粒单转染和共转染到SKOV3／TAX，Hoechst 33342与PI双染后荧光显 微镜检测细胞凋亡情况，CCK-8法分析细胞增殖情况和对紫杉醇的敏感性。 结果 1．成功构建pGU6一GFP-neo—STMNl和pGUGFP—neo．MDRl质粒，酶切鉴定 和测序提示质粒构建正确。 2．Real．time PCR及Western-blot显示紫杉醇耐药细胞株SKOV3／TAX的 stathmin和mdrl基因的mRNA和蛋白表达明显高于人卵巢上皮癌细胞SKOV3(P O．05)。SKOV3／TAX细胞转染后，pGU6一GFP—neo-MDRl质粒对mdrl基因， pGU6一GFP-STMNl质粒对stathmin基因在mRNA和蛋白水平均有明显抑制 (PO．05)，阴性对照组与SKOV3／TAX细胞组相比并无统计学意义。 3．各组细胞经Hoechst 33342与PI双染后，荧光显微镜下可见对照组SKOV3／TAX 3 徐州医学院硕士学位论文细胞着色很浅；转染阴性质粒组变化不明显；转染pGU6-GFP-neo．MDRl质粒组和转 徐州医学院硕士学位论文 细胞着色很浅；转染阴性质粒组变化不明显；转染pGU6-GFP-neo．MDRl质粒组和转 染pGU6．GFP-neo．STMNI质粒组凋亡细胞增多；SKOV3／TAX细胞共转染组有较多明 亮的蓝色荧光着色细胞核，染色质浓缩，还有凋亡小体，凋亡最明显。 4．CCK-8示单独转染pGU6．GFP．IleO．MDRl质粒或pGU6．GFP．neo．STMNl质 粒均能抑制肿瘤细胞增殖，逆转耐药，共转染组效果更好。 结论体外RNAi可有效沉默卵巢癌紫杉醇耐药株SKOV3／TAX细胞内 stathmin和mdrl基因的表达，两个单靶点干扰均可诱导肿瘤细胞凋亡，抑制增殖， 逆转其紫杉醇耐药，双靶点联合干扰的效果更明显。从而为进一步的体内实验奠 定基础，为多靶点基因治疗提供新思路。 关键词RNAi：stathmim MDR；紫杉醇耐药；卵巢癌 4 徐州医学院硕士学位论文Reverse 徐州医学院硕士学位论文 Reverse Paclitaxel Resistance by Targeting Stathmin And Mdrl in Ovarian Cancer Cell Abstract objective To investigate the feasibility of reversing paclitaxel resistance by RNA interference(RNAi)-mediated suppression of stathmin and mdrl genes in ovarian cancer cell． Methods 1．Two different plasmids targeting stathmin