稻瘟菌效应因子的筛选克隆及其功能研究作物遗传育种专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名：盔遢丞 日期：业年』月鱼日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 硕十学位论文 硕十学位论文 中文摘要 摘要 背景与目的：稻瘟菌效应因子(Effectorprotein，EP)由于其在致病过 程中扮演着重要角色而越来越受到广大植病学者的重视。对于EP的研究 能够揭示稻瘟菌和水稻之间的分子互作机理，为防治稻瘟病乃至彻底解决 这一病害问题提供帮助。目前关于EP的研究存在的困难主要表现在发掘 新的EP和研究其功能等方面。本研究通过对稻瘟菌全基因组的解读预测 分析与稻瘟菌侵染水稻36小时后转录组高通量测序分析的手段，同时结 合基因的特异性表达，期望成功筛选出一些重要的EP，并对其功能进行 探索。以期为探索克隆病原菌效应因子提供新的路线。 方法：(1)通过生物信息学分析稻瘟菌基因组预测基因和RORl侵染日 本晴水稻36小时后的叶片总RNA高通量测序结果，同时结合的基因特 异性表达验证(RTPCR)，筛选与致病相关的EP。(2)将已筛选出的EP 构建进水稻过表达载体pCambia 1305．2，通过水稻转化，获得水稻转基因 系。(3)分析2．30 1 8发现其具有BIR结构域，并通过构建稻瘟菌过表达载 体pCBl532、稻瘟菌敲除载体(△T)、稻瘟菌重组启动子载体pCSN43 和烟草瞬时表达pvx系列载体研究其功能。 结果：(1)成功获得了45个候选EP，并最终确定了包括2．3018在内 的12个进行研究的EP，证明以上方法在发掘并克隆EP上是可行的。(2) 构建了研究EP的过表达载体，完成了水稻的转化，获得了水稻转基因植 株。(3)构建了研究2-3018的几种载体，为下一步研究其功能打下基础。 结论：(1)成功筛选出了一部分EP，为探索克隆病原菌效应因子提供 了新路线。(2)成功构建了EP水稻过表达载体pCambial305．2．EP，并通过 水稻转化，获得了水稻转基因系。(3)成功分析并发掘出EP2—3018的BIR 结构域，并构建了它的稻瘟菌过表达载体pCBl532．3018，稻瘟菌敲除载 体△T KF2．3018，ATKFbir，稻瘟菌重组启动子载体pCSN43．3018F1， pCSN43—3018F2，烟草瞬时表达载体PVX一3018，PVX—C93，PVX-C96， PVX．H1 09，PVX。Hl 14。 关键词： 稻瘟菌效应因子，RORl，高通量测序，2．3108，BIR结构 域 硕+学位论文 硕+学位论文 英文摘要 ABSTRACT Background and Obj ective：Rice blast fungus effector protein(EP) play an important role in the pathogenesis of Plant Pathology，SO there are many maj ority scholars pay more and more attention on it．The study on EP can reveal the molecular interaction between rice blast fungus and rice． Even help the rice occurrence of blast．At present．it iS di衔cult to explore EP and study its functions．In this study,we hope through prediction of rice blast fungus genome analysis and transcriptome analysis of high—throughput sequencing after 36 hours infection，combined with the specificity of gene exp