昆虫RNAi技术与方法-应用昆虫学报.PDFVIP

应用昆虫学报 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆ ＡｐｐｌｉｅｄＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ　 ２０１３ꎬ５０(５):１４５３－１４５７. ＤＯＩ:１０.７６７９/ ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５－１３５３.２０１３.１９９ 昆虫分子生物学技术专题 昆虫ＲＮＡｉ技术与方法∗ １ １ ２ ∗∗ 田宏刚　 刘同先 　 张文庆 (１. 西北农林科技大学 旱区作物逆境生物学国家重点实验室　 杨凌　 ７１２１００ꎻ ２. 中山大学 有害生物控制与资源利用国家重点实验室　 广州　 ５１０２７５) 摘　 要　 ＲＮＡｉ技术已在昆虫基因功能研究中取得了广泛的应用ꎮ 本文主要从ｄｓＲＮＡ 的设计、导入方法及 ＲＮＡｉ 结果分析方面作了概述ꎬ并对实验过程中存在的一些关键问题如ＲＮＡｉ特异性沉默ꎬｄｓＲＮＡ导入方法的选择及不 同昆虫ＲＮＡｉ多样性方面进行了讨论ꎮ 关键词　 昆虫ꎬＲＮＡｉꎬ注射法ꎬ饲喂法 ＲＮＡｉ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｉｎｓｅｃｔｓ １ １ ２∗∗ ＴＩＡＮ Ｈｏｎｇ￣Ｇａｎｇ 　 ＬＩＵ Ｔｏｎｇ￣Ｘｉａｎ 　 ＺＨＡＮＧ Ｗｅｎ￣Ｑｉｎｇ (１. Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｓｔｒｅｓｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｎ ｔｈｅ Ａｒｉｄ Ａｒｅａｓꎬａｎｄ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ｌｏｅｓｓ Ｐｌａｔｅａｕ Ｃｒｏｐ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＮｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＹａｎｇｌｉｎｇ　 ７１２１００ꎬＣｈｉｎａꎻ２. Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ＢｉｏｃｏｎｔｒｏｌꎬＳｕｎ Ｙａｔ￣ｓｅｎ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕａｎｇｚｈｏｕ　 ５１０２７５ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ　 ＲＮＡｉ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｈａｓ ｂｅｅｎ ａｐｐｌｉｅｄ ｗｉｄｅｌｙ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ. Ｗｅ ｈｅｒｅ ｓｕｍｍａｒｉｚｅ ｒｅｃｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｄｓＲＮＡ ｄｅｓｉｇｎꎬ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ＲＮＡｉ ｒｅｓｕｌｔ ａｎａｌｙｓｉｓꎬ ａｎｄ ａｌｓｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｓｏｍｅ ｋｅｙ ｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ＲＮＡｉ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓꎬｓｕｃｈ ａｓ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇꎬ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｃｈｏｉｃｅ ｆｏｒ ｄｓＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ＲＮＡｉ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｓｅｃｔ ｔａｘａ. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ　 ｉｎｓｅｃｔꎬＲＮＡｉꎬｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄꎬｆｅｅｄｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ 　 　 ＲＮＡｉ (ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ) 主要指 的是 由 ｃａｓｔａｎｅｕｍ之中的研究发现小于３１ ｂｐ 的小分子 ｄｓＲＮＡ(或ｓｉＲＮＡ)诱导的对靶标基因ｍＲＮＡ进行 ＲＮＡ并不能诱导ＲＮＡｉ产生(Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ. ꎬ２０１２)ꎬ 沉默的技术ꎬ由于其作用方式的相对特异性以及 因此本文所述的ＲＮＡｉ技术主要指的是由ｄｓＲＮＡ 操作简便、实验成本相对较低的特点ꎬ在昆虫特别 介导ꎮ 根据研究目的及昆虫种类的不同ꎬｄｓＲＮＡ 是遗传操作比较难的非模式昆虫中已经取得了广 的导入方式主要包括注射法和饲喂法ꎮ 在果蝇 泛的应用(Ｂｅｌｌéｓꎬ２０１０)ꎮ 在昆虫之中利用 ＲＮＡｉ