胶质瘤干祖细胞诱导宿主腹腔巨噬细胞恶性转化及机制的分析-神经外科学专业论文.docxVIP

I I 胶质瘤干祖细胞诱导宿主腹腔巨噬细胞恶性转化及机制的研究 中文摘要 胶质瘤干祖细胞诱导宿主腹腔巨噬细胞 恶性转化及机制的研究 中文摘要 第一部分：胶质瘤干祖细胞与小鼠巨噬细胞共培养产生的融合细胞 可转化成恶性巨噬细胞 目的 我们曾推测胶质瘤间质中的巨噬细胞（macrophage，MP）恶性转化是通过 胶质瘤干祖细胞（Glioma Stem Progenitor cells，GSPCs）与 MP 融合导致的。本文旨 在通过 GSPCs 与 MP 共培养来验证这种推测是否正确。 方法 将转有红色荧光蛋白基因(RFP)的 GSPCs(SU3)与表达增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的小鼠腹腔冲洗出的 MP 进行体外共培养；用单克隆方法建立表达 RFP+/GFP+ 双色荧光（黄色）的细胞系，然后进行癌细胞相关表型分析、致瘤性试验、鼠巨噬细 胞标记物检测。 结果 （1）这两种细胞共培养后，细胞群中出现为数不多的黄色细胞，并成功单 克隆到 C3,C4 和 C12 三株细胞。（2）C12 继续传代培养后分化出 RFP+、EGFP+和 RFP+/EGFP+三种类型细胞，但随着传代次数增多，EGFP+（绿色）细胞比例逐渐升高 而成为主体，RFP+/EGFP+（黄色）细胞比例逐渐下降并维持在较低水平，而 RFP+（红 色）细胞基本消失。（3）C12 细胞株中的 EGFP+细胞具有：①生长接触抑制消失，增 殖速度快，染色体异倍体等癌细胞特征；②在裸小鼠体内具有高致瘤率(5/5)；③表达 巨噬细胞特异性标记 CD68，大部分染色体为鼠端着丝粒。 结论 体外模型证明我们之前在实体瘤中观察到的人脑胶质瘤干祖细胞诱导宿主 巨噬细胞恶性转化可通过细胞融合途径实现。与我们先前从荷瘤鼠实体瘤组织中克隆 到恶性转化的巨噬细胞株(ihCTC)的体内实验一起，相互印证了肿瘤微环境中宿主巨 噬细胞恶性转化是客观存在的。宿主细胞与肿瘤干祖细胞融合后发生的恶变既为肿瘤 恶性进展和肿瘤异质性增添了新的内涵；又为肿瘤靶向治疗增加了新的靶标。 关键词：胶质瘤干祖细胞；荧光裸小鼠；巨噬细胞；细胞融合；恶性转化 II II 中文摘要 胶质瘤干祖细胞诱导宿主腹腔巨噬细胞恶性转化及机制的研究 第二部分：胶质瘤干祖细胞与巨噬细胞共培养时的社会活动: 细胞连接、融合及胞释事件的缩时摄影观察 目的 已有用细胞社会学去理解实时监测到的单个免疫细胞分泌的因子在免疫疾 病中所起作用的报告，通过分析免疫细胞社会中的肿瘤细胞与宿主巨噬细胞之间的关 系，旨在探寻肿瘤细胞社会中打破免疫平衡的大事件。 方法 釆用红绿双色荧光示踪胶质瘤干/祖细胞与宿主巨噬细胞共培养，单克隆其 中的黄色细胞，体外扩増培养后于活细胞工作站实时摄影缩时成像并视频分析目标细 胞的社会行为。 结果 相关细胞实时动态连续观察发现：①细胞间传递信息的连接管道的 6 种类 型。②两个活跃细胞相互作用后变成一个细胞，即细胞融合；已融合的细胞与另一个 细胞再融合。③融合细胞的命运有对称分裂产生子细胞和瞬间凋亡二种。④存在一个 细胞进入另一细胞内（cell in cell）后胞释(entosis)现象。 结论 胶质瘤干/祖细胞与宿主巨噬细胞间连接方式，融合、分裂及胞释过程，可 作为胶质瘤干/祖细胞诱导宿主巨噬细胞恶变的细胞行为学依据，对进一步理解肿瘤 细胞社会成员间的复杂关系有重要意义。 关键词：胶质瘤干细胞；荧光示踪；细胞融合；细胞社会； 活细胞缩时摄影 作 者：王 林 指导教师：董 军 PAGE III PAGE III 胶质瘤干祖细胞诱导宿主腹腔巨噬细胞恶性转化及机制的研究 英文摘要 Preliminary studies on malignant transformation of murine macrophages cells induced by glioma stem progenitor cells Abstrcat Part I: Malignant transformation of fusion cells derived from the co-cultured glioma stem progenitor cells and macrophages Objective We have hypothesized that the malignant transformation of macrophages (MPs) in glioma was induced by fusion of glioma stem progenitor cells (GSPCs) with MPs.The purpose of this study was to verify this hypothesis by co-culturi